ICS 65.020.30 B 44 中华人民共和国国家标准 GB/T 14926.51—2001 实验动物 免疫酶试验 Laboratory animalImmunoenzyme assay(IEA) 2001-08-29发布 2002-05-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 GB/T14926.51—2001 前 言 本标准修订了GB/T14926.18—1994《实验动物 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒检测方法》中的免 疫酶试验方法，将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位：中国实验动物学会。 本标准主要起草人：贺争鸣。 1 中华人民共和国国家标准 GB/T14926.51—2001 实验动物 免疫酶试验 Laboratory animalImmunoenzyme assay(IEA) 1范围 本标准规定了免疫酶试验（IEA)所用试剂、器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒抗体的检测。 2原理 含有病毒抗原的细胞固定于玻片上，遇相应抗体形成抗原抗体复合物。此抗原抗体复合物仍保持 其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应。在普通显微镜下，根据颜色 的反应判定结果。 3主要试剂与器材 3.1试剂 3.1.1抗原片 3.1.1.1抗原片的制备 将病毒接种敏感细胞（表1），待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后，用胰酶消化分 散细胞，PBS洗涤三次，最后用适量PBS悬浮细胞。将细胞悬液滴于玻片孔内。同时消化不感染病毒 的同批同种细胞，滴加同一玻片另一孔内，作为正常细胞对照。孔内滴加的细胞以细胞铺开、不重叠为 宜。室温干燥后，冷丙酮（4℃）固定10min。用蒸馏水漂洗后充分干燥，置于一20℃备用。 3.1.1.2抗原片的鉴定 每批抗原片在使用前，用相应的阳性血清和阴性血清进行鉴定。鉴定方法可用IEA或免疫荧光试 验。在阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应无色；阳性血清与正常细胞反应无色，而与病毒感染细 胞呈棕褐色，且阳性细胞数达30%～50%时，此批抗原片可以使用。 3.1.2酶结合物 抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬或猴IgG抗体辣根过氧化物酶结合物用于检查相应动物的血清抗 体。葡萄球菌蛋白A(SPA)辣根过氧化物酶结合物可代替抗小鼠、豚鼠、兔、犬和猴IgG抗体辣根过氧 化物酶结合物使用。 3.1.3阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或SPF级小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通级免、犬、猴所获得的抗血清；或自然 感染恢复后的犬、猴血清 3.1.4阴性血清 清洁或SPF级小鼠、天鼠、豚鼠、地鼠血清；或确认无相应病毒感染的兔、犬、猴血清。 3. 1.5 PBS(0. 01 mol/L,pH7. 4) 氯化钠 8 g 氯化钾 0.2 g 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2001-08-29批准 2002-05-01实施