ICS 65.020.20 CCS B 05 3301 浙江省杭州市 地方 标准 DB3301/T 1119—2023 杂交兰种苗组培快繁技术规程 2023-02-28发布 2023-03-28实施 杭州市市场监督管理局 发布 DB3301/T 1119 —2023 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由杭州市农业农村局提出、归口并组织实施。 本文件起草单位：杭州市农业科学研究院。 本文件主要起草人：李春楠、傅巧娟、张晓莹、赵福康、钱丽华、阮若昕、沈国正。 DB3301/T 1119 —2023 1 杂交兰种苗组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了杂交兰种苗组培扩繁的组培苗培养、组培苗驯化移栽、质量等级、包装、标签和运输 的要求。 本文件适用于杂交兰种苗组培扩繁至驯化栽培的生产过程。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321 （所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 —2010 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 —2007 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 杂交兰 Cymbidium hybrid 由国兰和大花蕙兰种间杂交选育的一类兰花 杂交种。 类原球茎 protocorm -like bodies 兰花外植体诱导培养时，茎尖生长点组织逐渐膨大形成的 、可发育成 完整试管苗的 扁形球状物。 4 组培苗培养 外植体的选择和处理 4.1.1 母株的预处理 于春秋季，宜使用 50%多菌灵可湿性粉剂 800倍液等广谱杀菌剂，对长势均匀、无病虫害且带有新 生芽的健康母株进行灌根处理，每隔 3天1次，连续处理 2次～3次，放置于通风良好、清洁、干燥的 环境，温度宜 15 ℃～25 ℃，光照宜 8000 lux ～12000 lux 。 4.1.2 外植体的选取 母株基质干透后，选择苞叶尚未展开、露出基质表面 2 cm～6 cm的新生芽，从基部切断取下，置 于无菌样品袋中带回实验室。 DB3301/T 1119 —2023 2 4.1.3 外植体消毒 4.1.3.1 用洁净的软毛刷轻刷外植体表面，去除表面污垢，浸入洗洁精等清洁剂中震荡清洗 50 min～ 80 min，再流水充 分冲洗，置于超净工作台上。 4.1.3.2 剥去1片～2片外苞叶， 75%酒精浸泡消毒 90 s，无菌水清洗 2次～3次。 4.1.3.3 再剥去1片～2片外苞叶，浸入 10% NaClO 溶液，加入 2滴～3滴吐温20，处理10 min，无 菌水清洗 3次～4次。 4.1.3.4 浸入0.1% HgCl 2溶液，加入 2滴～3滴吐温20，根据芽的大小灭菌 15 min～17 min，无菌水 清洗5次～6次。 4.1.3.5 再剥去1片～2片外苞叶，将剥离的芽浸入 0.05% HgCl 2溶液中消毒 60 s，无菌水清洗 5次～ 6次。 初代培养 4.2.1 接种 取消毒后的芽，剥离 0.3 cm～0.5 cm的茎尖组织接种于初代培养基诱导类原球茎。 4.2.2 培养基 培养基配方宜为： 1/2MS + 1 mg/L 6 -BA + 1 mg/L IBA+ 1 g/L 活性炭+ 30 g/L 蔗糖+ 5 g/L 琼 脂，pH值 5.6～5.8。 4.2.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度 500 lux～1000 lux ，温度（ 25±1）℃；暗培养时温度为（ 20±1）℃。 继代培养 4.3.1 转接 初代培养 60 d后，将诱导形成的类原球茎分割为体积约 0.4 cm × 0.4 cm × 0.4 cm的团块，接 种于继代培养基上，每隔 60 d～75 d继代一次，分割时去除类原球茎上分化的芽和根，继代次 数不宜 超过 12代。 4.3.2 培养基 培养基配方宜为： Hyponex 1 （花宝1号）+ 0.5 mg/L 6 -BA + 0.5 mg/L NAA + 50 g/L 香蕉泥+ 2 g/L水解酪蛋白 + 1 g/L活性炭+ 30 g/L 蔗糖+ 5 g/L琼脂，pH值 5.6～5.8。 4.3.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度 500 lux～1000 lux ，温度（ 25±1）℃；暗培养时温度为（ 20±1）℃。 分化培养 4.4.1 转接 将增殖的类原球茎分割为体积约 0.4 cm × 0.4 cm × 0.4 cm的团块，转接至分化培养基上分化 成芽，类原球茎之间的距离不宜少于 1.5 cm。 4.4.2 培养基 DB3301/T 1119 —2023 3 培养基配方宜为： 1/2MS + 0.5 mg/L 6 -BA + 0.1 mg/L NAA + 10% 椰汁+ 0.2 g/L 活性炭+ 20 g/L 蔗糖+ 6 g/L琼脂，pH值 5.6～5.8。 4.4.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度 1200 lux ～2000 lux ，温度（ 25±1）℃；暗培养时温度为（ 20±1）℃。 生根培养 4.5.1 转接 待芽长至 3 cm～5 cm时，将其切下接种于生根培养基培养 50 d～70 d。 4.5.2 培养基 培养基配方宜为： Hyponex 1 （花宝1号）+ 0.1 mg/L 6 -BA + 0.5 mg/L NAA + 100 g/L 香蕉泥+ 2 g/L水解酪蛋白 + 1 g/L活性炭+ 30 g/L 蔗糖+ 7 g/L琼脂，pH值 5.6～5.8。 4.5.3 培养条件 光照16 h/d，光照强度 2000 lux ～2500 lux ，温度（ 25±1）℃；暗培养时温度为（ 20±1）℃。 5 组培苗驯化移栽 瓶苗驯化 当苗高长至 8 cm～12 cm、根数达到 3条～5条、根长 3 cm～5 cm时，将瓶苗转移至温室驯化培 养，覆盖 70%遮阳率的遮阳网 5 d～7 d，而后揭去遮阳网继续培养 10 d～20 d，移栽前，打开瓶口放 置2 d～3 d。光照强度宜 4000 lux ～5000 lux ，白天温度宜 25 ℃～30 ℃，夜间温度不宜低于 20 ℃， 宜春、秋两季驯化。 瓶苗移栽 取出幼苗，洗净根部培养基，宜用 50%多菌灵可湿性粉剂 1000倍液等广谱杀菌剂浸泡 15 min，晾 干至根变白后移栽至营养钵。宜选用经消毒的基质，体积比为松鳞、鹿沼土与仙土 =1:1:1。 幼苗栽培管理 栽后具体管理措施详见附录 A。 6 质量等级 组培苗质量等级见附录 B。 7 包装、标签和运输 包装 7.1.1 组培瓶苗 DB3301/T 1119 —2023 4 将符合质量标准的组培瓶苗用封口膜封住瓶口，整齐排列装于纸箱中，瓶与纸箱之间用海绵等缓冲 物隔离填充。 7.1.2 营养钵苗 将营养钵苗整齐排列于纸箱中，缝隙用海绵等缓冲物隔离填充。幼苗在包装前应根据运输时间和环 境控制基质水分含量，一般包装时栽培基质含水量根据包装方式及贮运时间控制，通常应控制在 50%以 内，外观为表面基质较干，盆内基质湿润。密封的包装箱箱侧应设通风孔。 标签 每箱应贴上标签，标明品种名称、等级、数量、产地、出苗日期等，并在纸箱上做好“请勿倒置” 的明显标志。 运输 运输时选择整洁的保温车辆，车厢内温度保持在 15 ℃～25 ℃之间，车辆行驶过程中避免剧烈颠 簸以防组培瓶破碎或幼苗脱落，并应在 5 h以内到达目的地。此外，不宜在严寒、酷热天气运输。 8 模式图 杂交兰种苗生产模式图 见附录C。