ICS 65.020.40 × DB23 B 61 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2581—2020 兴安杜鹃组培育苗技术规程 2020-01-23 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020-02-22 实施 发 布 DB23/T 2581—2020 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省林业和草原局提出并归口。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、大兴安岭昌茂源农业发展有限公司、黑龙江省美溪林 业局、黑龙江省大兴安岭农林科学院、林口县青山国家落叶松良种基地等。 本标准主要起草人：王丹、舒钰、杨晶、赵学丽、马盈、温爱亭、马龙军、唐仲秋、刘会锋、李琪、 孙峰巍、王建康、赵威、端木繁义、曲虹。 I DB23/T 2581—2020 兴安杜鹃组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了兴安杜鹃（Rhododendron dauricum L.）组培育苗技术的外植体采集制作、培养条件、 培养基配制、组织培养、炼苗移栽和生产档案。 本标准适用于兴安杜鹃组培育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306—2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 外植体采集制作 3.1 采集 5 月末至 7 月末的晴天，选择生长健壮的植株做采集母树，剪取当年生未木质化枝条水培备用，长 度 20 cm～30 cm 为宜。 3.2 制作 将枝条剪成带 1 个～2 个腋芽的幼嫩茎段，长度 2 cm～3 cm，去掉下端叶片，顶端叶片保留 1/2。 4 培养条件 4.1 分化诱导及继代增殖培养 -2 -1 培养室的温度控制在25 ℃±3 ℃，相对空气湿度控制在70 %～80 %，光照强度为27 μmol•m •s ～ -2 -1 36 μmol•m •s ，光照时间为12 h/d。 4.2 生根培养 光照时间为14 h/d，其他同4.1。 5 培养基配制 5.1 培养基选择 5.1.1 诱导分化培养基 诱导分化培养基配方;1/4 MS + GA3(1.0 mg/L）+ IBA(0.5 mg/L）+ 蔗糖（30 g/L）+ 琼脂（7 g/L）， pH = 5.4。MS培养基配方参见NY/T 2306—2013中附录F.1。 1 DB23/T 2581—2020 5.1.2 继代增殖培养基 继代增殖培养基配方：1/4 MS + 6-BA (1.0 mg/L) + IBA (0.5 mg/L) + 蔗糖30 g/L + 琼脂7.0 g/L，pH = 5.4。 5.1.3 生根培养基 生根培养基配方：1/4 MS + IBA(1.0 mg/L) + GA3(0.5 mg/L) + 蔗糖30 g/L + 琼脂7.0 g/L，pH = 5.4。 5.2 培养基制备 将蒸馏水、基本培养基、蔗糖、琼脂混合加热溶解，再加入生长调节剂（IBA、6-BA、GA3），调节 pH 值，分装入水洗干燥后的培养瓶中，封口。生长调节剂配制方法参见 NY/T 2306—2013 中附录 H。 5.3 培养基灭菌 瓶装培养基应在 10 h 内完成高压灭菌，压力 0.105 MPa、温度 121 ℃、灭菌 20 min。 5.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7 d内使用，2 ℃～4 ℃条件下15 d内使用。培养基应保存 于洁净环境中，避光和防尘。 6 组织培养 6.1 外植体消毒 6.1.1 清洗 用去污粉洗涤外植体2 min～3 min，流水冲洗干净。 6.1.2 酒精处理 用75 %的酒精灭菌15 s ～ 30 s，无菌水冲洗3 次。 6.1.3 次氯酸钠处理 用1 %的次氯酸钠溶液浸泡经酒精处理的外植体，浸泡过程中不断轻摇培养瓶，浸泡10 min～15 min 后倒出次氯酸钠溶液，再用无菌水冲洗3 次～5 次。 6.2 接种 外植体经过消毒，放在无菌滤纸上吸干水分，去掉两端损害部分，放入培养瓶中，每个培养瓶放3 个～4个外植体，盖上瓶盖儿，标注日期。 6.3 分化诱导培养 将消毒好的茎段接种到5.1.1分化诱导培养基上，待分化成高1.5 cm～3 cm的不定芽时进行继代增殖 培养。 6.4 继代增殖培养 将不定芽接种到 5.1.2 继代增殖培养基上，待分化为 3 cm ～ 5 cm 高的丛生芽时进行生根培养。 6.5 生根培养 2 DB23/T 2581—2020 选取生长健壮的丛生芽，接种到 5.1.3 生根培养基上，待丛生芽基部长出 3 条～5 条主根且有二级 根出现时即可进行炼苗移栽。 7 炼苗移栽 7.1 炼苗 将培养瓶放置在散色光的温室内，温度控制在25 ℃±3 ℃，封口培养3 d。 7.2 移栽 7.2.1 基质准备 将泥炭土 + 珍珠岩按1:1比例混合好装入育苗容器中，育苗容器宜选用高为8 cm 、口径为 8 cm的营 养钵，用2 ‰的高锰酸钾溶液喷淋灭菌后备用。 7.2.2 洗苗 取出已生二级根的组培苗放入清水中，清洗干净根部培养基。 7.2.3 移栽 将洗净的组培苗移栽至已备好的营养钵中，保持根系舒展，幼苗直立，基质覆盖至组培苗基部，稍 压实。 7.3 管理 7.3.1 温度 苗期温度控制在18 ℃ ～ 28 ℃。宜用遮光度30 % ～ 50 %的遮荫网控制小拱棚内温度，当温度过高时， 可适时通风降温。 7.3.2 空气湿度 采用薄膜小拱棚保持空气湿度在70 % ～ 80 %，当第一片新叶完全展开时，可逐渐打开薄膜降低湿度； 30 d后完全打开薄膜，空气湿度保持在60 %～70 %。 7.4 露地栽植标准 当幼苗生长健壮、株型饱满、具有完整而发达的根系、苗高在15 cm ～ 25 cm时，可进行露地移栽。 8 生产档案 应建立生产档案，内容包括：材料采集、培养基配制、外植体消毒、培养条件、练苗移栽及管理等。 3