ICS 11.020 C 05 DB22 吉 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 396.5—2017 代替 DB22/T 396-2014 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第 5 部分：皮肤变态反应试验 Toxicological evaluation procedures and test methods for health care products Part 5: Skin allergy test 2017 - 11 - 10 发布 吉林省质量技术监督局 2017 - 12 - 30 实施 发 布 1 DB22/T 396.5—2017 前 言 DB22/T 396《保健用品毒理学评价程序与检验方法》拟分为如下部分： ——第 1 部分：评价程序； ——第 2 部分：急性经皮毒性试验； ——第 3 部分：长期经皮毒性试验； ——第 4 部分：皮肤刺激性试验； ——第 5 部分：皮肤变态反应试验； ——第 6 部分：细菌回复突变试验； ——第 7 部分：啮齿动物微核试验； ——第 8 部分：小鼠精子畸形试验； ——第 9 部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验； ——第 10 部分：致畸试验； ——第 11 部分：致癌试验； ——第 12 部分：人体皮肤斑贴试验。 本部分为DB22/T 396-2071的第5部分。 本部分按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本部分代替DB22/T 396-2014《保健用品毒理学评价程序与检验方法》，与DB22/T 396-2014相比， 结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术内容变化如下： ——增加了警示； ——增加了范围； ——增加了仪器； ——增加了附录 A。 本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。 本部分起草单位：吉林省疾病预防控制中心。 本部分主要起草人：孟令仪、宋昕恬、张晶莹、孙兰、吴晓刚、隋自洁、高峰。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： ——DB22/T 396-2004； ——DB22/T 396-2014。 DB22/T 396.5—2017 保健用品毒理学评价程序与检验方法 第 5 部分：皮肤变态反应试验 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问 题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了保健用品毒理学皮肤变态反应试验评价程序。 本标准适用于保健用品毒理学皮肤变态反应试验检验方法。 2 保健用品毒理学皮肤变态反应试验检验方法 2.1 材料 2.1.1 动物 2 白色豚鼠30 只，体重250 g～300 g。于给受试物前24 h，将豚鼠背部毛脱掉，去毛范围每侧约4 cm ～ 2 6 cm ,体表面积估算值计算方法见附录A。 2.1.2 受试物 如为固体粉末，需用适量的赋形剂混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。如受试物是液体或半固 体的膏剂，可直接用于试验。 2.2 仪器 电子天平：精确到0.1 g。 2.3 试验方法 2.3.1 试验分组 将豚鼠按体重随机分组，试验组20只，对照组10只。 2.3.2 致敏接触 取受试物0.2 mL(或g)，涂在动物左侧背部脱毛区皮肤上，以二层纱布和一层硫酸纸覆盖，再以无 刺激胶布封闭固定6 h，第7 d和第14 d，以同样方法重复一次。 2.3.3 激发接触 于末次给受试物致敏后14 d～28 d，将受试物约0.2 mL（或g）涂于豚鼠背部右侧脱毛区，然后以 二层纱布和一层硫酸纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6 h。激发接触后24 h、48 h观察皮肤反应情况。 按表1皮肤变态反应评分标准评分。 2.3.4 试验要求 DB22/T 396.5—2017 阴性对照组操作和观察方法同受试物组，在诱导接触时仅涂赋形剂，在激发接触时涂以受试物。对 照组动物必须和受试物动物为同一批。在实验室开展变态反应试验初期，或使用新的种属或品系时，需 同时设阳性对照组，给予适当浓度的2,4-二硝基氯代苯（DNCB）。 2.4 结果评价 2.4.1 当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2 时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按表 2 判断受 试物的致敏率。致敏率的计算是：将出现皮肤变态反应阳性（不论程度轻重）的动物例数除以受试动物 总数。 2.4.2 如激发接触所得结果仍不能确定，应于第一次激发后一周，给予第二次激发，对照组作同步处 理。 表 1 皮肤变态反应的评分标准 皮肤反应 积分 红斑和焦痂形成 无红斑 0 轻度红斑（勉强可见） 1 明显红斑（散在或小块红斑） 2 中度～重度红斑 3 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 4 水肿形成 无水肿 0 轻微水肿（勉强可见） 1 中度水肿（皮肤隆起，轮廓清楚） 2 重度水肿（皮肤隆起约 1mm 或超过 1mm） 3 最高总分值 7 表 2 变态反应致敏强度 2 致敏率，% 致敏强度 0～8 弱 9～28 轻 29～64 中 65～80 强 81～100 极强 DB22/T 396.5—2017 AA 附 录 A （规范性附录） 实验动物体表面积估算方法 A.1 兔 2 s = k × m 3 ..................................... (A.1) 式中： s ——体表面积，cm2； k ——常数，一般成年家兔为 10； m ——动物体重，g。 例：体重 2 kg 成年家兔体表面积： s = 10 × 2000 2 3 2 lg S = lg 10 + lg 2000 3 = 1 + 0.667 × 3.3010 = 1 + 2.2008 = 3.2008 查反对数表：S = 1588cm 2 A.2 豚鼠 2 s = k × m 3 ..................................... (A.2) 式中： s ——体表面积，cm2； k ——常数， k = 9.26 ； m ——动物体重，g。 例:体重 438 g 豚鼠的体表面积： 2 lg S = lg 9.26 + lg 438 3 2 = 0.9666 + × 0.8805 3 = 0.9666 + 1.7610 = 2.7276 查反对数表：S = 534cm 2 DB22/T 396.5—2017 A.3 大鼠、小鼠 2 s = k × m 3 ..................................... (A.3) 式中： s ——体表面积，cm2； k ——常数， k = 0.0913 ； m ——动物体重，g。 例：体重 200g 大鼠的体表面积： s = 0.0913 × (0.2) 3 2 2 lg S = lg 0.0913 + lg 0.2 3 2 = 2.9605 + × 1.3010 3 = 2.9605 + 1.5340 = 2.1945 查反对数表：S = 3.123cm 2 _________________________________ 4