ICS 65.202.20 B 31 备案号：51629-2017 海 南 DB46 省 地 方 标 准 DB46/T 411—2016 台农 16 号菠萝组培苗生产技术规程 2016-10-08 发布 海南省质量技术监督局 2016-12-08 实施 发 布 DB46/T 411—2016 前  言 本标准按照 GB/T 1.1 给出的规则起草。 本标准由海南省质量技术监督局提出。 本标准由海南省农业厅归口。 本标准起草单位：海南省农业科学院热带果树研究所。 本标准起草人：范鸿雁、华敏、何凡、罗志文、郭利军、何舒、李向宏。 I DB46/T 411—2016 台农 16 号菠萝组培苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了台农16号菠萝组培苗有关的术语和定义、组培工厂的要求、组培苗的要求、分组标准、 外植体的选择、处理和接种、初代培养、继代培养、成苗培养、生根培养、练苗、移栽、检测等系列生 产技术要求。 本标准适用于台农16号菠萝组培苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5569 农业植物调运检疫规程 NY/T 451 菠萝 种苗 3 术语和定义 下列术语和定义和NY/T 451中确定的术语和定义适用于本文件。 3.1 吸芽 着生于母株地上茎叶腋间的芽。 3.2 芽培养 将吸芽的芽尖作为外植体进行组织培养。 3.3 变异苗 在组织培养过程中，因体细胞变异而出现的花叶、叶片扭曲黄化、幼苗茎部徒长显弱、叶片短小、 生根阶段出现矮化株等的表型变异。 4 要求 4.1 4.1.1 组培工厂要求 工厂组成 1 DB46/T 411—2016 组培工厂包括准备室、接种室、培养室、观察检测室等场所。 4.1.2 环境条件 组培工厂应建在排水设施、通风条件良好、远离各种污染源，环境干燥，空气清新，通风透光。 4.1.3 准备室 用于各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培 养材料的预处理等的场所，应宽敞明亮、通风良好，地面应便于清洁，又可防滑。 4.1.4 接种室 用于植物材料的消毒和接种、培养物的继代转移等的场所，应无尘、无对流空气的洁净环境。工作 人员进入室内前，应换上洁净的工作服、工作帽和拖鞋，避免带入杂菌引起空气污染接种工具。 4.1.5 培养室 培养室应具备控制湿度、温度、光照等设施条件，保持清洁卫生。 4.1.6 观察检测室要求 方便观察、检测组培苗是否干净不受污染。 4.2 苗木要求 4.2.1 基本要求 4.2.1.1 瓶苗 ——种源来自品种纯正、优质高产的母本园或母株； ——品种纯度≥98%； ——无污染； ——继代培养不超过 12 代，时间不超过 20~25 个月； ——根系有分杈、侧根及根毛； ——茎叶生长正常； ——变异率≤2%。 4.2.1.2 袋装苗 ——种源来自品种纯正的瓶苗； ——苗龄 6 个月~9 个月； ——品种纯度≥98%； ——植株粗壮，生长正常，根系生长良好； ——无检疫性病虫害； ——变异率≤5%。 4.2.2 分级标准 4.2.2.1 瓶苗分级标准 台农16号菠萝组培苗瓶苗除符合4.2.1.1外，分级应符合表1的规定。 2 DB46/T 411—2016 4.2.2.2 袋装苗分级标准 台农16号菠萝组培苗袋装苗除符合4.2.1.2外，分级应符合表2的规定。 台农 16 号菠萝组培苗瓶苗分级指标 表1 项 级 目 变异苗 一级 二级 三级 种苗高(h),mm h≥19.5 15.4≤h＜19.5 9.4≤h＜15.4 h≤8.3 种苗茎粗(d),mm d≥5.4 4.2≤d＜5.4 3.5≤d＜4.2 d≤2.7 最长叶长(l),mm l≥17.6 14.3≤l＜17.6 8.2≤l＜14.3 l≤4.3 最长叶宽(w),mm w≥6.4 4.8≤w＜6.4 4.5≤w＜4.8 w≤2.6 品种纯度(p), % p≥98.0 p≥95.0 p≥92.0 - 表2 项 5 别 台农 16 号菠萝组培苗袋装苗分级指标 目 级 别 一级 二级 三级 种苗高(h),mm h≥400 250≤h＜400 165≤h＜250 种苗茎粗(d),mm d≥23.5 17≤d＜23.5 10.5≤d＜17 最长叶长(l),mm l≥325 200≤l＜325 140≤l＜200 最长叶宽(w),mm w≥18.9 19.3≤w＜18.9 15.2≤w＜19.3 品种纯度(p), % p≥98.0 p≥95.0 p≥92.0 台农 16 号菠萝组培苗生产流程 外植体的选择→外植体的处理→接种→初代培养→继代培养→壮苗→生根培养→炼苗→移栽。 5.1 外植体的选择 5.1.1 母本园的选择 母本园必须是无检疫性病虫害的台农16号菠萝种植园。 5.1.2 母株的确定 选择品种纯正、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的植株，并逐株编号及跟踪观察，果实性状良 好的确定为母株。 5.1.3 外植体的采集 选择连续3 d以上晴天，在13:00~16:00之间采取母株的吸芽。 5.2 5.2.1 外植体的处理 预处理 从母本园采取的健康吸芽用自来水冲洗20 min，剥除最外层叶片后用饱和肥皂水浸泡30 min，取出 用自来水冲洗干净，再去掉外围几张叶片后，将叶片剪短，放入灭过菌的容器内待用。 3 DB46/T 411—2016 5.2.2 消毒 在无菌操作台上进行无菌操作，用1%KMnO4浸泡经预处理的外植体5 min，无菌水冲洗3 ~5次；75% 酒精处理30 s，无菌水冲洗2次，0.1% HgCl2消毒15 min，无菌水冲洗3 ~5 次，用灭菌纸吸干水待用。 5.3 初代培养 5.3.1 培养基配方 MS+6-BA 0.5mg/L + NAA0.1mg/L + KT 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉胶6 g/L，pH 5.8~pH 6.0。 5.3.2 培养条件 培养温度25℃~28℃，初期3~4 d暗培养，15天以后，光照时间10 h/d ~12 h/d，光照强度1500 Lx。 5.3.3 接种 按5.2.2消毒后的外植体在无菌条件下，在无菌滤纸上剥除外部叶片，切除多余的叶伤口部分，直至 露出1.5 cm~2 cm的芽点，再纵剖成两块外植体，接种于初代培养基上。 5.4 继代培养 5.4.1 培养基配方 3/2MS+ 6-BA 0.25 mg/L+ NAA0.5 mg/L +蔗糖30 g/L+卡拉胶6 g/L，pH 5.8~6.0。 5.4.2 培养条件 培养温度25℃~28℃，光照时间10 h/d ~12 h/d，光照强度1500 Lx~2000 Lx。 5.4.3 接种 将初代培养获得的丛生芽，到继代培养基中培养；切成若干小层芽，每层含有2~3个小芽，同时切 除抽生过高的叶片、枯死老叶及基部愈伤组织，剔除不正常芽，以2~3个小芽转接到继代培养基上，周 期为35 d。 5.5 生根培养 5.5.1 培养基配方 1/2MS+6-BA0.1 mg/L+IBA 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉胶6 g/L，pH 5.8~6.0。 5.5.2 培养条件 培养温度25℃~28℃，光照时间8 h/d~10 h/d，光照强度500Lx~1000 Lx。 5.5.3 接种 继代获得的丛芽长高至4cm~6 cm时，切取生长健壮、叶色舒展、叶色正常生根的丛芽，接种到生根 培养基上。 5.5.4 炼苗 生根培养15 d后，组培苗高度达到9.4 cm以上，长至6cm~8 cm，生根率达100%，每株3条以上不定 根时，根系发达完整，可置于75%遮光率的荫棚内炼苗，15 d后可移栽。 4 DB46/T 411—2016 5.6 移栽与管理 5.6.1 生根苗洗净消毒后分级放置，分块移栽，不合格苗沙培假植； 5.6.2 消毒时，可选用用 50%百菌清可湿性粉剂或 50%多菌灵可湿性粉剂 1000 倍液消毒 5 min，即可 移栽至混合基质中； 5.6.3 混合基质配方为：下层基质（红土、椰糠、泥炭土按 3:1.5:0.5），上层基质泥炭土； 5.6.4 移栽后马上淋水定根；移栽 2d~3 d 后开始喷杀菌剂，如多菌灵、百菌清等；第 1 周内每天喷雾 水 3~4 次，使相对湿度保持在 80%左右，温度控制在 26℃~32℃，遮光率为 75%以上；15 d 后，叶面喷 施 0.1%~0.2%的 KH2PO4。 6 检疫 初代培养后取1个增殖芽作好标记，送有关植检部门进行病毒血清学检测（ELISA）。经验证无病 株号的增殖芽方能继续增殖培养，用以生产大量组培苗；而有病株号的增殖芽则应全部销毁。如需调运， 种苗应符合GB 15569的规定。 7 7.1 包装、标志、运输和贮存 包装 瓶苗可保留在组培容器中，并用木箱或纸箱包装；袋装苗应用木箱、塑料箱等硬质包装箱包装。 7.2 标志 种苗应附有标签。标签内容包括类型（瓶苗或袋装苗）、品种、检验证书编号、等级、数量（株数）、 育苗单位、出厂（圃）日期。包装箱外应贴标签，注明品种、等级、规格、数量、产地、出苗日期等。 标签样式详见附录A。 7.3 运输 按不同品种、级别装车。用蓬车辆运输，并保持通风透气；运输途中避免日晒、雨淋；装车时应小 心轻放。 7.4 贮存 种苗出厂（圃）后应在当日装运，到达目的地后要立即卸车，并置于荫棚或阴凉处。瓶苗应及时炼 苗，袋装苗应及早定植，若有特殊情况无法及时定植时，贮存时间不应超过6 d，贮存时置于荫棚中， 保持通风，并经常喷水保持基质湿润。 5 DB46/T 411—2016 AA 附 录 A （资料性附录） 菠萝组培苗标签 附 录 B菠萝组培苗标签 单位：cm 1.50 8.00 菠萝组培苗 2.00 瓶 苗 袋装苗 品 种 等 2.00 2.00 级 2.00 2.00 a）正面 1.50 2.00 6.00 育苗单位 1.20 证书编号 1.20 2.00 数量(株) 出圃日期 1.20 b）反面 注：标签用厚度为0.3 mm的白色聚乙烯塑料薄片。标签孔用金属包边 图 A.1 菠萝组培苗标签 ________________________