GB/T 17816--1999 前 言 本标准参考了美国公职分析化学家协会A0AC(1995年版）45.1.14～45.1.16《维生素制品和果汁 中的维生素C》、《维生素制品中的维生素C》和《食品中的总维生素C》的规定，在技术内容上，综合上述 三种方法，在操作步骤上作了相应的变更，以便于实际操作。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心（武汉）负责起草。 本标准主要起草人：屈利文、钱肪。 262 中华人民共和国国家标准 饲料中总抗坏血酸的测定 邻苯二胺荧光法 GB/T 17816—1999 Determination of total ascorbic acid in feeds- o-Phenylenediamine fluorometry 1范围 本标准规定了用邻苯二胺荧光法测定饲料中总抗坏血酸的方法。 本标准适用于单一饲料、配合饲料、预混料及浓缩饲料。不适用以酯化抗坏血酸形式添加的各种饲 料中抗坏血酸的测定。 在最终提取液中抗坏血酸最小检出限为0.022μg/mL。 2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T6682--1992分析实验室用水规格和试验方法 3方法原理 先将试样中抗坏血酸在弱酸性条件下提取出来，提取液中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗 坏血酸，与邻苯二胺（OPDA）反应生成有荧光的喹喔啉（quinoxaline），其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓 度在一定条件下成正比。另外，根据脱氢抗坏血酸与硼酸可形成硼酸-脱氢抗坏血酸络合物而不与邻苯 二胺反应，以此作为“空白”排除试样中荧光杂质的干扰。 4试剂 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。 实验室用水应符合GB/T6682中三级水的规格。 4.1偏磷酸-乙酸溶液：称取15g偏磷酸，加入40mL冰乙酸及250mL水，加温，搅拌，使之逐渐溶解， 冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7~10天。 4.20.15mol/L硫散溶液：取10mL硫酸，小心加入水中，再加水稀释至1200mL。 4.3偏磷酸-乙酸-硫酸溶液：以0.15mol/L硫酸溶液（4.2)为稀释液代替水，其余同4.1配制。 4.450%乙酸钠溶液：称取500g乙酸钠（CH，C00Na·3H.0），加水至1000mL。 4.5硼酸-乙酸钠溶液：称取3g硼酸，溶于100mL乙酸钠溶液（4.4）中。临用前配制。 4.6邻苯二胺溶液：称取20mg邻苯二胺，于临用前用水稀释至100ml。 4.7抗坏血酸标准溶液（1mg/mL）：准确称取50mg抗坏血酸，用溶液（4.1)溶于50mL容量瓶中，并 稀释至刻度。临用前配制。 4.8抗坏血酸标准工作溶液（100μg/mL）：取10mL抗坏血酸标准溶液（4.7），用溶液（4.1）稀释至 国家质量技术监督局1999-08-10批准 2000-02-01实施 263