ICS 65.120 B 46 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 1985—2013 饲料中无机砷的测定 液相色谱-原子荧光 光谱法 Determination of inorganic arsenic in the feed liquid chromatography - atomic fluorescence spectrometry 2013 - 12 - 18 发布 2013 - 12 - 31 实施 吉 林省质 量 技 术监 督 局 发 布 DB22/T 1985 —2013 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院。 本标准起草人：韩冰雪、吴桐、赵立群、戴欣、王宇、张爽、王岩、王潇、任明月 I DB22/T 1985 —2013 饲料中无机砷的测定 液相色谱-原子荧光光谱（LC-AFS）法 1 范围 本标准规定了食品中无机砷含量测定的液相色谱-原子荧光光谱法。 本标准适用于家禽、猪配合饲料，家禽、猪浓缩饲料，家禽、猪添加剂预混合饲料以及饲料原料鱼 粉，肉粉，肉骨粉中无机砷含量的测定。 本方法检出限为：无机砷0.02 mg/kg。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 饲料中无机砷经硝酸提取后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性环境下与还原剂反 应，生成气态砷化合物，以原子荧光光谱仪进行测定。按保留时间定性，外标法定量。 4 4.1 4.2 4.3 4.4 试剂与材料 除非另有规定，本方法所使用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 磷酸二氢铵（NH4H2PO4,CAS 号：7722-76-1）。 硼氢化钾（KBH4,CAS 号：13762-51-1）。 氢氧化钾（KOH,CAS 号：1310-58-3）。 硝酸（HNO3,CAS 号：7697-37-2）。 4.5 盐酸（HCl,CAS 号：7647-01-0） 。 4.6 氨水（NH3·H2O,CAS 号：1336-21-6） 。 4.7 正己烷（CH3(CH2)4CH3,CAS 号：92112-69-1）。 4.8 磷酸二氢铵溶液（20 mmol/L）：称取 2.3 g 磷酸二氢铵，溶于 1000 mL 水中，以浓氨水调整 pH 值至 8.0，经 0.45 μm 水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气 30 min，备用。 4.9 盐酸溶液（20%(v/v)）：量取 200 mL 浓盐酸，溶于水并稀释至 1000 ml。 4.10 硝酸溶液（0.15 mol/L ）：量取 10 mL 浓硝酸，溶于水并稀释至 1000 ml。 4.11 氢氧化钾溶液（100 g/L）：称取 10 g 氢氧化钾，溶于水并稀释至 100 ml。 4.12 氢氧化钾溶液（2 g/L）： 称取 2 g 氢氧化钾，溶于水并稀释至 1000 ml。 4.13 硼氢化钾溶液（30 g/L）：称取 30 g 硼氢化钾，用 2 g/L 氢氧化钾溶液溶解并定容至 1000 ml。 当日配制使用。 1 DB22/T 1985 —2013 4.14 磷酸二氢铵溶液（1 mmol/L）：量取 20 mmol/L 磷酸二氢铵溶液 50 mL，纯水稀释至 1000 mL， 以浓氨水调 pH 值至 9.0，经 0.45 μm 水系滤膜过滤后，于超声水浴中超声脱气 30 min，备用。 4.15 购买有证的 AsIII 、AsV 标准溶液。 5 仪器 5.1 液相色谱-原子荧光光谱联用仪（LC-AFS）：由液相色谱仪与原子荧光光谱仪组成。 5.2 天平：感量为 1 mg 及 0.1 mg。 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 组织匀浆器。 高速粉碎机。 冷冻干燥机。 离心机：转速≥8000 r/min。 pH 计：精度为 0.01。 C4 净化小柱或等效柱。 注：玻璃器皿使用前经（1+4）硝酸浸泡24 h后，清洗、晾干后备用。 6 分析步骤 6.1 试样制备 饲料样品经高速粉碎机粉碎，过100目筛。 6.2 提取 称取1 g（准确至0.01g）试样，置于10 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL 0.15 mol/L HNO3溶液，密 闭。于90℃恒温箱中热浸提2.5 h，每半小时振摇1 min。提取完毕，取出冷却至室温，8000 r/min离心 15 min。取5 mL上清液置于离心管中，加入5 mL正己烷，振摇1 min后，8000 r/min离心15 min，弃去 上层液体。按此过程重复一次。吸取下层清液，经0.45 mm有机滤膜过滤及C4小柱净化后进样。 注意：C4小柱使用前需进行活化。其活化参考过程为：新柱使用前依次用10 mL甲醇、15 mL水通过， 静置活化30 min后可用。每净化完一个样品需依次以10 mL甲醇、15 mL水通过，完成后可立即对下一个 样品进行净化。净化样品时，所通过C4小柱的液体应弃去前3 mL，收集之后流出的液体进样测定。该小 柱可重复使用若干次。 6.3 推荐仪器参考条件 6.3.1 液相色谱参考条件 色谱柱：阴离子交换色谱柱，阴离子交换色谱保护柱。 流动相组成：A：1 mmol/L 磷酸二氢铵溶液（pH 9.0）；B：20 mmol/L 磷酸二氢铵溶液（pH 8.0）。 流动相洗脱方式：梯度洗脱（梯度洗脱程序见表3）。流动相流速：1.0 mL/min；进样体积：100 μL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 0 8 10 20 22 23 流动相A 100% 100% 0% 0% 100% 100% 流动相B 0% 0% 100% 100% 0% 0% 2 DB22/T 1985 —2013 6.3.2 原子荧光检测参考条件 负高压：280 V；灯电流：30 mA；原子化温度：200 ℃；炉高：8 mm；载气：氩气；载气流速：300 mL/min；屏蔽气流速：400 mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；载液：20 %（v/v） HCl；流速4 mL/min； 还原剂：30 g/L硼氢化钾溶液，流速4 mL/min。 6.4 标准曲线制作 配制标准系列溶液的浓度分别为0.0 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L和100 μg/L。 吸取标准系列溶液100 μL注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪进行分析，得到色谱图，确定个组分 保留时间。以标准系列溶液中目标化合物的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 6.5 试样溶液的测定 吸取试样溶液100 μL注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪中，得到色谱图，以保留时间定性。根据 III V III V 标准曲线得到试样溶液中As 与As 含量，As 与As 含量的加和为总无机砷含量，平行测定次数不少于 两次。 7 分析结果的表述 试样中无机砷的含量按公式（1）计算： X = (C - C 0 ) ´ V m ´ 1000 ……………………………………… （1） 式中： X——样品中无机砷的含量，mg/kg； C0——经标准曲线得到的空白溶液中无机砷化合物浓度，µg/L； C——经标准曲线得到的测定溶液中无机砷化合物浓度，μg/L； V——提取液体积，mL； m——试样称样量，g； X无机砷= XAsIII +XAsV。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15 %。 A 3 DB22/T 1985 —2013 附 录 A （资料性附录） 无机砷参考色谱图 A.1 无机砷参考色谱图见图A.1 图A.1 无机砷参考色谱图 _________________________________ 4