中华人民共和国国家标准 GB 4789.11-2014 食品安全 国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌 检验 2014-12-01发布 2015-05-01实施 GB 4789.11—2014 I 前 言 本标准代替 GB/T 4789.11 －2003《食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验》 。 本标准与 GB/T 4789. 11－2003相比， 主要变化如下： ——修改了标准名称； ——修改了范围； ——增加了术语和定义； ——修改了设备与材料； ——修改了培养基与试剂； ——删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤 和杆菌肽敏感试验 ； ——增加了触酶试验 ； ——增加了附录 A。 GB 4789.11—2014 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验 1 范围 本标准规定了食品中 β型溶血性链球菌（ Streptococcus ）的检验方法。 本标准适用于食品中 β型溶血性链球菌的检验。 2 术语和定义 2.1 β型溶血 在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。 2.2 β型溶血性链球菌 能够产生 β型溶血的化脓（或 A群）链球菌 （Streptococcus pyogenes）和无乳（或 B群）链球菌 （Streptococcus agalactiae ）。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a) 恒温培养箱： 36 ℃± 1 ℃； b) 冰箱： 2 ℃～5 ℃； c) 厌氧培养装置 ； d) 天平：感量 0.1 g； e) 均质器与配套均质袋 ； f) 显微镜： 10倍～100倍； g) 无菌吸管： 1 mL（具 0.01 mL刻度） 、 10 mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头 ； h) 无菌锥形瓶：容量 100 mL、200 mL、2 000 mL ； i) 无菌培养皿：直径 90 mm； j) pH计或 pH比色管或精密 pH试纸； k) 水浴装置 ：36 ℃±1 ℃； l) 微生物生化鉴定系统。 4 培养基和试剂 4.1 改良胰蛋白胨大豆肉汤 （Modified tryptone soybean broth, m TSB）：见附录 A中A.1。 4.2 哥伦比亚 CNA血琼脂 (Columbia CNA blood agar) ：见附录 A中A.2。 4.3 哥伦比亚血琼脂 (Columbia blood agar) ：见附录 A中A.3。 4.4 革兰氏染色液 ：见附录 A中A.4。 4.5 胰蛋白胨大豆肉汤 （Tryptone soybean broth, TSB）：见附录 A中A.5。 4.6 草酸钾血浆 ：见附录 A中A.6。 GB 4789.11—2014 2 4.7 0.25％氯化钙 (CaCl 2)溶液：见附录 A中A.7。 4.8 3％过氧化氢 (H2O2)溶液：见附录 A中A.8。 4.9 生化鉴定试剂盒 或生化鉴定 卡。 5 检验程序 溶血性链球菌 检验程序见图 1。 图1 溶血性链球菌 检验程序 6 操作步骤 6.1 样品处理及增菌 按无菌操作称取检样 25 g（mL） ， 加入盛有 225 mL m TSB的均质袋中， 用拍击式均质器均质 1 min～ 2 min；或加入盛有 225 mL m TSB的均质杯中，以 8000 r/min ～10000 r/min 均质 1 min～2 min。若样品为 液态，振荡均匀即可。 36 ℃± 1 ℃培养 18 h～24 h。 6.2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚 CNA血琼脂平板， 36 ℃±1 ℃厌氧培养 18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌 在哥伦比亚 CNA血琼脂平板上的 典型菌落 形态为直径约2 mm～3 mm，灰白色、半透18 h ~ 24 h 样品 25g（或mL）+ 225 mL m TSB 划线接种 哥伦比亚 CNA血琼脂平板 革兰氏染色镜检 /触酶试验 确定鉴定 生化鉴定 链激酶试验 (选做项目 ) 报 告 挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板和 TSB 36 ℃±1 ℃ 18 h～24 h ，厌氧培养 36 ℃±1 ℃ 18 h～24 h 36 ℃±1 ℃