中华人民共和国国家标准 GB4789.35—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB4789.35—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB4789.35—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》、 SN/T1941.1—2007《进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分:分离与计数方法》。 本标准与GB4789.35—2010相比,主要变化如下: ———增加了乳酸菌总数计数培养条件的选择及结果说明; ———修改了改良MRS培养基成分; ———修改了平板计数的接种方法和接种量。GB4789.35—2016 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验 1 范围 本标准规定了含乳酸菌食品中乳酸菌(lacticacidbacteria)的检验方法。 本标准适用于含活性乳酸菌的食品中乳酸菌的检验。 2 术语和定义 2.1 乳酸菌 lacticacidbacteria 一类可发酵糖主要产生大量乳酸的细菌的通称。本标准中乳酸菌主要为乳杆菌属(Lactobacillus)、双 歧杆菌属(Bifidobacterium)和嗜热链球菌属(Streptococcus)。 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 3.1 恒温培养箱:36℃±1℃。 3.2 冰箱:2℃~5℃。 3.3 均质器及无菌均质袋、均质杯或灭菌乳钵。 3.4 天平:感量0.01g。 3.5 无菌试管:18mm×180mm、15mm×100mm。 3.6 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 3.7 无菌锥形瓶:500mL、250mL。 4 培养基和试剂 4.1 生理盐水:见A.1。 4.2 MRS(ManRogosaSharpe)培养基及莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin)和半胱氨酸盐酸盐(Cysteine Hydrochloride)改良MRS培养基:见A.2和A.3。 4.3 MC培养基(ModifiedChalmers培养基):见A.4。 4.4 0.5%蔗糖发酵管:见A.5。 4.4 0.5%纤维二糖发酵管:见A.5。 4.6 0.5%麦芽糖发酵管:见A.5。 4.7 0.5%甘露醇发酵管:见A.5。 4.8 0.5%水杨苷发酵管:见A.5。 4.9 0.5%山梨醇发酵管:见A.5。 4.10 0.5%乳糖发酵管:见A.5。GB4789.35—2016 2 4.11 七叶苷发酵管:见A.6。 4.12 革兰氏染色液:见A.7。 4.13 莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin):化学纯。 4.14 半胱氨酸盐酸盐(CysteineHydrochloride):纯度>99%。 5 检验程序 乳酸菌检验程序见图1。 图1 乳酸菌检验程序图 6 操作步骤 6.1 样品制备 6.1.1 样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。 6.1.2 冷冻样品可先使其在2℃~5℃条件下解冻,时间不超过18h,也可在温度不超过45℃的条件 解冻,时间不超过15min。 6.1.3 固体和半固体食品:以无菌操作称取25g样品,置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内,于 8000r/min~10000r/min均质1min~2min,制成1∶10样品匀液;或置于225mL生理盐水的无菌 均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min制成1∶10的样品匀液。 6.1.4 液体样品:液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐 水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分振摇,制成1∶10的样品匀液。