中华人民共和国国家标准 GB4789.36—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB4789.36—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T4789.36—2008《食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》。 本标准与GB/T4789.36—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验”; ———修改了标准的范围; ———修改了设备和材料; ———修改了培养基和生化反应的文字描述; ———删除“第二法免疫磁珠捕获法的原理”; ———删除“第三法全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法”; ———删除“第四法全自动病原菌检测系统筛选法”。GB4789.36—2016 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 1 范围 本标准规定了食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM(EscherichiacoliO157:H7/NM)的检验方法。 本标准适用于食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 2.1 恒温培养箱:36℃±1℃。 2.2 冰箱:2℃~5℃。 2.3 恒温水浴箱:46℃±1℃。 2.4 天平:感量0.1g、0.01g。 2.5 均质器。 2.6 显微镜:10倍~100倍。 2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或移液器及吸头。 2.8 无菌均质杯或无菌均质袋:容量500mL。 2.9 无菌培养皿:直径90mm。 2.10 pH计或精密pH试纸。 2.11 长波紫外光灯:365nm,功率≤6W。 2.12 微量离心管:1.5mL或2.0mL。 2.13 磁板、磁板架、样品混合器。 2.14 微生物鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 改良EC肉汤(mEC+n):见A.1。 3.2 改良山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC):见A.2。 3.3 三糖铁琼脂(TSI):见A.3。 3.4 营养琼脂:见A.4。 3.5 半固体琼脂:见A.5。 3.6 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(MUG-LST):见A.6。 3.7 氧化酶试剂:见A.7。 3.8 革兰氏染色液:见A.8。 3.9 PBS-Tween20洗液:见A.9。 3.10 亚碲酸钾(AR级)。GB4789.36—2016 2 3.11 头孢克肟(Cefixime)。 3.12 大肠埃希氏菌O157显色培养基。 3.13 大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂。 3.14 鉴定试剂盒。 3.15 抗-E.coliO157免疫磁珠。 第一法 常规培养法 4 检验程序 大肠埃希氏菌O157:H7/NM常规培养法检验程序见图1。 图1 大肠埃希氏菌O157:H7/NM常规培养法检验程序 5 操作步骤 5.1 增菌 以无菌操作取检样25g(或25mL)加入到含有225mLmEC+n肉汤的均质袋中,在拍击式均质 器上连续均质1min~2min;或放入盛有225mLmEC+n肉汤的均质杯中,8000r/min~ 10000r/min均质1min~2min。36℃±1℃培养18h~24h。