中华人民共和国国家标准 GB5009.111—2016 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 及其乙酰化衍生物的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.111—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.111—2003《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》、GB/T23503— 2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、SN/T1571—2005 《进出口粮谷中呕吐毒素检验方法 液相色谱法》。 本标准与GB/T5009.111—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测 定”; ———增加了方法的适用范围; ———增加了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇乙酰化衍生物的测定; ———增加了同位素稀释液相色谱-串联质谱法; ———增加了固相萃取柱净化的前处理方式; ———增加了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法; ———增加了商业化免疫亲和柱评价技术参数要求。GB5009.111—2016 1 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇 及其乙酰化衍生物的测定 1 范围 本标准规定了食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定方法。 第一法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法,适用于谷物及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中脱 氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。 第二法为免疫亲和层析净化高效液相色谱法,适用于谷物及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。 第三法为薄层色谱测定法,第四法为酶联免疫吸附筛查法,适用于谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌 烯醇的测定。 第一法 同位素稀释液相色谱-串联质谱法 2 原理 试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和 乙腈的混合溶液提取,提取上清液经固相萃取柱或免疫亲和柱净化,浓缩、定容和过滤后,超高压液相色 谱分离,串联质谱检测,同位素内标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.3 正己烷(C6H14)。 3.1.4 氨水(NH3·H2O)。 3.1.5 甲酸(HCOOH)。 3.1.6 氮气(N2):纯度≥99.9%。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙腈-水溶液(84+16):量取160mL水加入到840mL乙腈中,混匀。 3.2.2 乙腈饱和的正己烷溶液:量取200mL正己烷于250mL分液漏斗中,加入少量乙腈,剧烈振摇 数分钟,静置分层,弃去下层乙腈层即得。GB5009.111—2016 2 3.2.3 甲醇-水溶液(5+95):量取5mL甲醇加入到95mL水中,混匀。 3.2.4 0.01%氨水溶液:取100μL氨水加入到1000mL水中,混匀(仅供离子源模式为ESI-时使用)。 3.2.5 0.1%甲酸溶液:取1mL甲酸加入到1000mL水中,混匀(仅供离子源模式为ESI+时使用)。 3.3 标准品 3.3.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON,C15H20O6,CAS号:51481-10-8):纯度≥99%,或经国家认证并授予 标准物质证书的标准物质。 3.3.2 3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON,C17H22O7,CAS号:50722-38-8):纯度≥99%,或经国家 认证并授予标准物质证书的标准物质。 3.3.3 15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON,C17H22O7,CAS号:88337-96-6):纯度≥99%,或经国 家认证并授予标准物质证书的标准物质。 3.3.4 13C15-脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液(13C-DON,13C15H20O6):25μg/mL,纯度≥99%。 3.3.5 13C17-3-乙酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇同位素标准溶液(13C-3-ADON,13C17H22O7):25μg/mL,纯度 ≥99%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液(100μg/mL):分别称取DON、3-ADON和15-ADON1mg(准确至0.01mg),分 别用乙腈溶解并定容至10mL。将溶液转移至试剂瓶中,在-20℃下密封保存,有效期1年。 3.4.2 混合标准工作溶液(10μg/mL):准确吸取100μg/mLDON、3-ADON和15-ADON标准储备液 各1.0mL于同一10mL容量瓶中,加乙腈定容至刻度。在-20℃下密封保存,有效期半年。 3.4.3 混合同位素内标工作液(1μg/mL):准确吸取13C15-DON和13C17-3-ADON同位素内标 (25μg/mL)各1mL于同一25mL容量瓶中,加乙腈定容至刻度。在-20℃下密封保存,有效期 半年。 3.4.4 标准系列工作溶液:准确移取适量混合标准工作溶液和混合同位素内标工作液,用初始流动相 配制成10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL、320ng/mL、640ng/mL的混合标准 系列,其中同位素内标浓度为100ng/mL。标准系列溶液于4℃保存,有效期7d。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源。 4.2 电子天平:感量0.01g和0.00001g。 4.3 高速粉碎机:转速10000r/min。 4.4 匀浆机。 4.5 筛网:0.5mm~1mm孔径。 4.6 超声波/涡旋振荡器或摇床。 4.7 氮吹仪。 4.8 高速离心机:转速不低于12000r/min。 4.9 移液器:量程10μL~100μL和100μL~1000μL。 4.10 固相萃取装置。 4.11 通用型固相萃取柱:兼具亲水基团(吡咯烷酮基团)和疏水基团(二乙烯基苯)吸附剂填料的固相 萃取小柱,200mg,6mL,或相当者。 4.12 DONs专用型固相净化柱,或相当者。 4.13 脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱:柱容量≥1000ng(柱容量和柱回收率验证方法参见A.2)。