中华人民共和国国家标准 GB5009.118—2016 食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.118—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.118—2008《谷物中T-2毒素的测定》、GB/T23501—2009《食品中T-2毒 素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、SN/T1771—2006《进出口粮谷中T-2毒素的测定 免疫亲和柱-液相色谱法》、SN/T2676—2010《进出口粮谷中T-2毒素的检测方法 酶联免疫吸附法》。 本标准与GB/T5009.118—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定”; ———增加了适用范围; ———增加了直接ELISA法二。GB5009.118—2016 1 食品安全国家标准 食品中T-2毒素的测定 1 范围 本标准规定了食品中T-2毒素的测定方法。 本标准第一法适用于粮食及粮食制品,酒类,酱油、醋、酱及酱制品中T-2毒素含量的测定,第二法、 第三法适用于粮食及粮食制品中T-2毒素的测定。 第一法 免疫亲和层析净化液相色谱法 2 原理 用提取液提取试样中的T-2毒素,经免疫亲和柱净化、衍生后,用高效液相色谱荧光检测器测定,外 标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.3 甲苯(C6H5CH3):色谱纯。 3.1.4 4-二甲基氨基吡啶。 3.1.5 1-蒽腈(1-anthroylnitrile,1-AN)。 3.2 试剂配制 3.2.1 提取液:甲醇-水(8∶2,体积比)。 3.2.2 4-二甲基氨基吡啶溶液:准确称取0.0325g4-二甲基氨基吡啶于100mL容量瓶中,用甲苯定容 至刻度。 3.2.3 1-蒽腈溶液:准确称取0.030g1-蒽腈于100mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度。 3.3 标准品 T-2毒素(C24H34O9,CAS号:21259-20-1):纯度≥98.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液:准确称取适量的T-2毒素标准品(精确至0.0001g),用乙腈溶解,配制成浓度为GB5009.118—2016 2 100μg/mL的标准储备液,-18℃以下避光保存。 3.4.2 标准工作液:根据需要准确吸取适量的标准储备液,用乙腈稀释,配制成5ng/mL、10ng/mL、 50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的标准工作液,4℃避光保存。 3.5 材料 3.5.1 T-2毒素免疫亲和柱:柱规格1mL或3mL,柱容量≥1500ng,或等效柱。 3.5.2 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5μm,无荧光特性。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。 4.2 高速粉碎机:转速≥12000r/min。 4.3 均质器:转速≥12000r/min。 4.4 氮吹仪。 4.5 离心机。 4.6 涡旋混合仪。 4.7 空气压力泵。 4.8 试验筛:孔径1.0mm。 4.9 天平:感量0.0001g和0.01g。 4.10 超声波发生器:功率>180W。 4.11 玻璃注射器:10mL。 5 分析步骤 5.1 提取 5.1.1 粮食及粮食制品 将样品研磨,硬质的粮食等用高速粉碎机磨细并通过试验筛。称取25.0g(精确到0.1g)试样于烧 杯中,用提取液溶解,转移至容量瓶中,用提取液定容至100mL,混匀,涡旋振荡提取10min,定量滤纸 过滤。移取10.0mL滤液加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.1.2 酱油、醋、酱及酱制品 称取25.0g(精确到0.1g)混匀的试样,用甲醇定容至50.0mL,超声提取10min,定量滤纸过滤。 移取10.0mL滤液加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.1.3 酒类 取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30min,过滤或超声脱气)或其他 不含二氧化碳的酒类试样20.0g(精确到0.1g)于50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,定量滤纸 过滤。移取10.0mL滤液加入40mL水稀释,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.2 净化和洗脱 将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下,准确移取10.0mL5.1中的提取滤液,注入玻璃注射器中。将 空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进