中华人民共和国国家标准 GB5009.124—2016 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.124—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.124—2003《食品中氨基酸的测定》。 本标准与GB/T5009.124—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定”; ———扩大了适用范围; ———增加了方法的检出限和定量限; ———修改了结果计算的公式。GB5009.124—2016 1 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定 1 范围 本标准规定了用氨基酸分析仪(茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪)测定食品中氨基酸的方法。 本标准适用于食品中酸水解氨基酸的测定,包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨 酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共16种氨 基酸。 2 原理 食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应, 再通过可见光分光光度检测器测定氨基酸含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 盐酸(HCl):浓度≥36%,优级纯。 3.1.2 苯酚(C6H5OH)。 3.1.3 氮气:纯度99.9%。 3.1.4 柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O):优级纯。 3.1.5 氢氧化钠(NaOH):优级纯。 3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸溶液(6mol/L):取500mL盐酸加水稀释至1000mL,混匀。 3.2.2 冷冻剂:市售食盐与冰块按质量1∶3混合。 3.2.3 氢氧化钠溶液(500g/L):称取50g氢氧化钠,溶于50mL水中,冷却至室温后,用水稀释至 100mL,混匀。 3.2.4 柠檬酸钠缓冲溶液[c(Na+)=0.2mol/L]:称取19.6g柠檬酸钠加入500mL水溶解,加入 16.5mL盐酸,用水稀释至1000mL,混匀,用6mol/L盐酸溶液或500g/L氢氧化钠溶液调节pH至 2.2。 3.2.5 不同pH和离子强度的洗脱用缓冲溶液:参照仪器说明书配制或购买。 3.2.6 茚三酮溶液:参照仪器说明书配制或购买。 3.3 标准品 3.3.1 混合氨基酸标准溶液:经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液。GB5009.124—2016 2 3.3.2 16种单个氨基酸标准品:固体,纯度≥98%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 混合氨基酸标准储备液(1μmol/mL):分别准确称取单个氨基酸标准品(精确至0.00001g)于 同一50mL烧杯中,用8.3mL6mol/L盐酸溶液溶解,精确转移至250mL容量瓶中,用水稀释定容至 刻度,混匀(各氨基酸标准品称量质量参考值见表1)。 3.4.2 混合氨基酸标准工作液(100nmol/mL):准确吸取混合氨基酸标准储备液1.0mL于10mL容 量瓶中,加pH2.2柠檬酸钠缓冲溶液定容至刻度,混匀,为标准上机液。 4 仪器和设备 4.1 实验室用组织粉碎机或研磨机。 4.2 匀浆机。 4.3 分析天平:感量分别为0.0001g和0.00001g。 4.4 水解管:耐压螺盖玻璃试管或安瓿瓶,体积为20mL~30mL。 4.5 真空泵:排气量≥40L/min。 4.6 酒精喷灯。 4.7 电热鼓风恒温箱或水解炉。 4.8 试管浓缩仪或平行蒸发仪(附带配套15mL~25mL试管)。 4.9 氨基酸分析仪:茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。 5 分析步骤 5.1 试样制备 固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎,液体试样用匀浆机打成匀浆密封冷冻保存,分析 用时将其解冻后使用。 5.2 试样称量 均匀性好的样品,如奶粉等,准确称取一定量试样(精确至0.0001g),使试样中蛋白质含量在 10mg~20mg范围内。对于蛋白质含量未知的样品,可先测定样品中蛋白质含量。将称量好的样品 置于水解管中。 很难获得高均匀性的试样,如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再做稀释。 对于蛋白质含量低的样品,如蔬菜、水果、饮料和淀粉类食品等,固体或半固体试样称样量不大于 2g,液体试样称样量不大于5g。 5.3 试样水解 根据试样的蛋白质含量,在水解管内加10mL~15mL6mol/L盐酸溶液。对于含水量高、蛋白质 含量低的试样,如饮料、水果、蔬菜等,可先加入约相同体积的盐酸混匀后,再用6mol/L盐酸溶液补充 至大约10mL。继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。 将水解管放入冷冻剂中,冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充 入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖。 将已封口的水解管放在110℃±1℃的电热鼓风恒温箱或水解炉内,水解22h后,取出,冷却至 室温。