中华人民共和国国家标准 GB5009.154—2016 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.154—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.154—2003《食品中维生素B6的测定》、GB5413.13—2010《食品安全国家 标准 婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定》。 本标准与GB/T5009.154—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定”; ———增加了高效液相色谱法。GB5009.154—2016 1 食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定 1 范围 本标准规定了食品中维生素B6的测定方法。 本标准第一法为高效液相色谱法,适用于添加了维生素B6的食品测定;第二法为微生物法,适用于 各类食品中维生素B6的测定。 第一法 高效液相色谱法 2 原理 试样经提取等前处理后,经C18色谱柱分离,高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量测定维生 素B6(吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺)的含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 辛烷磺酸钠(C8H17NaO3S)。 3.1.2 冰乙酸(C2H4O2)。 3.1.3 三乙胺(C6H15N):色谱纯。 3.1.4 甲醇(CH4O):色谱纯。 3.1.5 盐酸(HCl)。 3.1.6 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.7 淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。 3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸溶液(5.0mol/L):量取45mL盐酸,用水稀释并定容至100mL。 3.2.2 盐酸溶液(0.1mol/L):吸取9mL盐酸,用水稀释并定容至1000mL。 3.2.3 氢氧化钠溶液(5.0mol/L):称取20g氢氧化钠,加50mL水溶解,冷却后,用水定容至100mL。 3.2.4 氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称取0.4g氢氧化钠,加50mL水溶解,冷却后,用水定容至 100mL。 3.3 标准品 3.3.1 盐酸吡哆醇(C8H12ClNO3,CAS号:58-56-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书GB5009.154—2016 2 的标准物质。 3.3.2 盐酸吡哆醛(C8H10ClNO3,CAS号:65-22-5):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质。 3.3.3 双盐酸吡哆胺(C8H14Cl2N2O3,CAS号:524-36-7):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质 证书的标准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 吡哆醇标准储备液(1mg/mL):准确称取60.8mg盐酸吡哆醇标准品,用0.1mol/L盐酸溶液溶 解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。 3.4.2 吡哆醛标准储备液(1mg/mL):准确称取60.9mg盐酸吡哆醛标准品,用0.1mol/L盐酸溶液溶 解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。 3.4.3 吡哆胺标准储备液(1mg/mL):准确称取71.7mg双盐酸吡哆胺标准品,用0.1mol/L盐酸溶液 溶解后定容到50mL,在-20℃下避光保存,有效期1个月。 3.4.4 维生素B6混合标准中间液(20μg/mL):分别准确吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的标准储备液各 1.00mL,用0.1mol/L盐酸溶液稀释并定容至50mL。临用前配制。 3.4.5 维生素B6混合标准系列工作液:分别准确吸取维生素B6混合标准中间液0.5mL、1.0mL、 2.0mL、3.0mL、5.0mL,至100mL容量瓶中,用水定容。该标准系列浓度分别为0.10μg/mL、 0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、1.00μg/mL。临用前配制。 注:标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参照附录A。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪:带荧光检测器。 4.2 天平:感量1mg和0.01mg。 4.3 pH计:精度0.01。 4.4 涡旋混合器。 4.5 超声波振荡器。 4.6 分光光度计。 4.7 恒温培养箱,或性能相当者。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 含淀粉的试样 a) 固体试样:称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.01g),于150mL锥形瓶中,加入约25 mL45℃~50℃的水,混匀。加入约0.5g淀粉酶,混匀后向锥形瓶中充氮,盖上瓶塞,置50 ℃~60℃培养箱内约30min。取出冷却至室温。 b) 液体试样:称取混合均匀的液体试样约20g(精确至0.01g)于150mL锥形瓶中,混匀。加入 约0.5g淀粉酶,混匀后向锥形瓶中充氮,盖上瓶塞,置50℃~60℃培养箱内约30min。取出 冷却至室温。 5.1.2 不含淀粉的试样 a) 固体试样:称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.01g),于150mL锥形瓶中,加入约25