中华人民共和国国家标准 GB5009.189—2016 食品安全国家标准 食品中米酵菌酸的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.189—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.189—2003《银耳中米酵菌酸的测定》。 本标准与GB/T5009.189—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中米酵菌酸的测定”; ———修改了适用范围; ———修改了试样制备,增加了固相萃取; ———增加了高效液相色谱条件; ———增加了附录A; ———规定了方法检出限和定量限; ———删除了薄层色谱法。GB5009.189—2016 1 食品安全国家标准 食品中米酵菌酸的测定 1 范围 本标准规定了银耳及其制品、酵米面及其制品等食品中米酵菌酸的测定方法。 本标准适用于银耳及其制品、酵米面及其制品等食品中米酵菌酸的测定。 2 原理 试样经提取、净化、浓缩及过滤后,经高效液相色谱仪分析,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 冰乙酸(CH3COOH)。 3.1.3 氨水(NH3·H2O)。 3.1.4 甲酸(CH2O2)。 3.1.5 盐酸(HCl)。 3.1.6 磷酸(H3PO4)。 3.1.7 碳酸氢钠(NaHCO3)。 3.1.8 石油醚(C5H12O2):沸程30℃~60℃。 3.1.9 无水乙醚(C4H10O)。 3.1.10 三氯甲烷(CHCl3)。 3.2 试剂配制 3.2.1 磷酸溶液(45.4%):量取45.4mL磷酸于100mL容量瓶中,用水稀释定容至刻度。 3.2.2 碳酸氢钠溶液(40g/L):称取40g碳酸氢钠加水溶解,转移至1000mL容量瓶中定容至刻度。 3.2.3 盐酸溶液(6mol/L):量取50mL盐酸于100mL容量瓶中,用水稀释定容至刻度。 3.2.4 甲醇-氨水溶液:量取80mL甲醇,加入1.0mL氨水,加水定容到100mL,混匀。 3.2.5 甲酸-甲醇溶液(2%):吸取2.0mL甲酸于100mL容量瓶中,用甲醇稀释定容至刻度。 3.3 材料 固相萃取柱:阴离子交换柱(60mg/3mL)或等效品,临用前依次加5.0mL甲醇和5.0mL水活 化,保持柱体湿润。GB5009.189—2016 2 3.4 标准品 米酵菌酸(C28H38O7,CAS号:11076-19-0):纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 3.5 标准溶液配制 3.5.1 米酵菌酸标准储备液(0.1mg/mL):准确称取米酵菌酸标准品1mg(精确至0.01mg),用甲醇 溶解,转移至10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度。置于2℃~8℃冰箱中避光保存,有效期为 6个月。 3.5.2 米酵菌酸标准系列工作液:分别吸取米酵菌酸标准储备液用甲醇稀释定容,配制成米酵菌酸浓度分 别为0.3μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的 标准工作溶液。临用时配制。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪,带二极管阵列检测器。 4.2 天平:感量分别为0.01g和0.01mg。 4.3 固相萃取装置。 4.4 超声波振荡器。 4.5 旋转蒸发仪。 4.6 氮吹仪。 4.7 微孔有机滤膜(孔径0.45μm)。 4.8 涡旋振荡器。 4.9 恒温水浴锅。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 固相萃取法 5.1.1.1 提取 干试样经粉碎过ϕ0.425mm筛后,称取20g(精确至0.01g)置于锥形瓶中,加入100mL甲醇-氨 水溶液;鲜(湿)试样经剪碎、匀浆后称取10g(精确至0.01g),加入80mL甲醇-氨水溶液。混匀,室温 下避光浸泡1h,置于超声波振荡器中超声提取约30min,过滤。干试样取滤液50mL,鲜(湿)试样取 滤液40mL。置80℃水浴中浓缩至约3mL,待净化。 5.1.1.2 净化 将浓缩后的试样全部转移到已活化的固相萃取柱中,依次用5mL水和5mL甲醇淋洗,弃去流出 液,抽干萃取柱,再用6mL甲酸-甲醇溶液(2%)洗脱,收集洗脱液,于40℃±0.5℃水浴中氮吹至干, 然后加入0.5mL甲醇,涡旋溶解,混匀,经微孔有机滤膜过滤后进行HPLC分析。 5.1.2 液-液萃取法 5.1.2.1 提取 干试样经粉碎过ϕ0.425mm筛后,称取20g(精确至0.01g),置于具塞锥形瓶中,加入20mL甲