中华人民共和国国家标准 GB5009.210—2016 食品安全国家标准 食品中泛酸的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.210—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.210—2008《食品中泛酸的测定》、GB5413.17—2010《食品安全国家标 准 婴幼儿食品和乳品中泛酸的测定》。 本标准与GB/T5009.210—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中泛酸的测定”; ———增加了高效液相色谱方法; ———修改了食品的前处理方法; ———增加了检出限和定量限。GB5009.210—2016 1 食品安全国家标准 食品中泛酸的测定 1 范围 本标准规定了食品中泛酸和泛酸钙的测定方法。 本标准第一法适用于食品中泛酸的测定,第二法适用于营养素补充剂类保健食品和配方食品中泛 酸(钙)的测定。 第一法 微生物法 2 原理 泛酸是植物乳杆菌Lactobacillusplantarum(ATCC8014)生长所必需的营养素,在一定控制条件 下,将植物乳杆菌液接种至含有试样液的培养液中,培养一定时间后测定透光率(或吸光度值),根据泛 酸含量与透光率(或吸光度值)的标准曲线计算出试样中泛酸的含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 盐酸(HCl)。 3.1.2 冰乙酸(C2H4O2)。 3.1.3 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.4 氯化钠(NaCl)。 3.1.5 碳酸钠(Na2CO3)。 3.1.6 碳酸氢钾(KHCO3)。 3.1.7 磷酸氢二钾(K2HPO4)。 3.1.8 三水合乙酸钠(C2H3O2Na·3H2O)。 3.1.9 三水合磷酸二氢钾(KH2PO4·3H2O)。 3.1.10 七水合硫酸镁(MgSO4·7H2O)。 3.1.11 七水合硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)。 3.1.12 一水合硫酸锰(MnSO4·H2O)。 3.1.13 三羟甲基氨基甲烷(C4H11NO3)。 3.1.14 葡萄糖(C6H12O6)。 3.1.15 甲苯(C7H8)。 3.1.16 无水乙醇(C2H6O)。 3.1.17 阴离子交换树脂Dowex1×8:粒度38μm~75μm。GB5009.210—2016 2 3.1.18 碱性磷酸酶:酶活力≥23U/g。 3.1.19 鸽子肝脏丙酮提取物干粉(liveracetonepowder,frompigeon):酶活力≥0.1U/g。 3.1.20 蛋白胨:含氮量≥10%。 3.1.21 酵母提取物:含氮量≥10%。 3.1.22 琼脂。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸溶液(0.2mol/L):吸取11.8mL冰乙酸,用水稀释至1000mL,混匀。 3.2.2 乙酸钠溶液(0.2mol/L):称取27.2g三水合乙酸钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。 3.2.3 盐酸溶液(1mol/L):吸取83mL盐酸,加水稀释至1000mL,混匀。 3.2.4 盐酸浸泡液:吸取100mL盐酸与50倍水混合。 3.2.5 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。 3.2.6 氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称取4g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。 3.2.7 Tris缓冲液:称取121.0g三羟甲基氨基甲烷溶于500mL水中,用冰乙酸调pH至8.1±0.1,加 水至1000mL,混匀。贮存于2℃~4℃冰箱中,可保存2周。 3.2.8 生理盐水:称取9g氯化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。临用前预先灭菌,于121℃高 压灭菌10min后备用。 3.2.9 乙醇溶液(20%):量取200mL无水乙醇与800mL水混匀。 3.2.10 碳酸钠溶液(0.08mol/L):称取8.5g碳酸钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。 3.2.11 碳酸氢钾溶液(0.02mol/L):称取2g碳酸氢钾,加水溶解并稀释至1000mL。混匀。 3.2.12 碱性磷酸酶溶液:称取2g碱性磷酸酶,加水溶解并稀释至100mL。临用现配,2℃~4℃冰箱 预冷。 3.2.13 鸽子肝脏提取液 3.2.13.1 活化Dowex1×8:称取100gDowex1×8于锥形瓶中,加入1L盐酸溶液,置于振荡器上充 分振摇10min,用铺有滤纸的布氏漏斗过滤。Dowex1×8转回锥形瓶,再加入1L盐酸溶液重复振摇、 过滤。Dowex1×8加入1L水振摇10min,过滤,重复用水洗涤10次。逐滴加入Tris缓冲液调节 Dowex1×8pH至8.0±0.1。2℃~4℃冰箱保存,2天内用完。 3.2.13.2 鸽子肝脏提取液:配制此试剂前一天将所用容器放入2℃~4℃冰箱中冷藏过夜。称取30g 鸽子肝脏丙酮提取物干粉,放入研钵中,冰浴条件下分两次加入300mL碳酸氢钾溶液研磨至匀浆,转 入具塞离心管中,盖好塞后充分振摇,-20℃冷冻10min后以3000r/min离心5min,将上清液转至 500mL广口瓶中。加150g活化Dowex1×8,放入冰浴中混匀5min,将混合液倒入离心管中, 3000r/min离心5min。将上清液移入另一500mL预冷的广口瓶中,-20℃冷冻10min,再加150g 活化Dowex1×8,放入冰浴中混匀5min,将混合液倒入离心管中,3000r/min离心,将上清液分装于 具塞试管中(每管大约3mL),-20℃冷冻保存。用前于2℃~4℃冰箱内化冻并保存至用时。 3.3 培养基 3.3.1 甲盐溶液:分别称取25g磷酸氢二钾和25g三水合磷酸二氢钾,加水溶解并稀释至500mL,混 匀。加入1mL甲苯,2℃~4℃冰箱可保存1年。 3.3.2 乙盐溶液:分别称取10g七水合硫酸镁、0.5g氯化钠、0.5g七水合硫酸亚铁和0.5g一水合硫 酸锰,加水溶解并稀释至500mL。加5滴盐酸,2℃~4℃冰箱可保存1年。 3.3.3 琼脂培养基:按表1称取或吸取各试剂,加水至100mL,混合,沸水浴加热至琼脂完全溶化。趁 热用1mol/L盐酸溶液和/或1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8±0.1。尽快分装,根据试管内径粗 细加入3mL~5mL,液面高度不得低于2cm。塞上棉塞,121℃高压灭菌15min。取出后试管直立放