中华人民共和国国家标准 GB5009.222—2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.222—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.222—2008《红曲类产品中桔青霉素的测定》、SN/T2426—2010《进出口粮 谷中桔霉素含量检测方法 液相色谱法》和SN/T2916—2011《出口食品中桔霉素的测定方法 免疫 亲和柱净化-高效液相色谱法》。 本标准与GB/T5009.222—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定”; ———增加了净化步骤; ———增加了适用范围。GB5009.222—2016 1 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定 1 范围 本标准规定了食品中桔青霉素的测定方法。 本标准第一法适用于大米、玉米、辣椒、红曲类产品中桔青霉素的测定,第二法适用于大米、大麦、燕 麦、小麦中桔青霉素的测定。 第一法 免疫亲和柱净化-高效液相色谱法 2 原理 试样中的桔青霉素用甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,用免疫亲和柱净化,采用液相色谱结合 荧光检测器测定桔青霉素的含量,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.3 磷酸(H3PO4):色谱纯。 3.1.4 冰乙酸(C2H4O2):色谱纯。 3.1.5 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.6 吐温20(C58H114O26)。 3.1.7 氯化钠(NaCl)。 3.1.8 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.1.9 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.10 氯化钾(KCl)。 3.2 试剂配制 3.2.1 氢氧化钠溶液(2mol/L):称取80.0g固体氢氧化钠,溶于1L水中。 3.2.2 磷酸溶液(10mmol/L,pH7.5):准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL,用2mol/L的 氢氧化钠溶液调节pH至7.5。 3.2.3 磷酸溶液(10mmol/L,pH2.5):准确移取1.376mL磷酸加水定容至2000mL,用2mol/L的 氢氧化钠溶液调节pH至2.5。 3.2.4 PBS缓冲溶液:称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾,用水溶解,GB5009.222—2016 2 调节pH至7.0,用水定容至1000mL。 3.2.5 0.1%吐温20-PBS溶液:准确移取1mL吐温20以PBS缓冲溶液定容至1000mL。 3.2.6 0.1%磷酸溶液:准确移取1mL磷酸加水定容至1000mL。 3.2.7 洗脱液Ⅰ:甲醇-10mmol/L磷酸溶液(pH2.5)(70+30)。 3.2.8 洗脱液Ⅱ:甲醇-0.1%磷酸溶液(70+30)。 3.3 标准品 桔青霉素(C13H14O5,CAS号:518-75-2),纯度≥99.0%。或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液:准确称取一定量的桔青霉素标准品,以甲醇溶解并定容至10.0mL作为标准储备 液,浓度为100μg/mL,于4℃下保存。 3.4.2 标准中间液:准确移取1.0mL桔青霉素标准储备液于10mL容量瓶中,用甲醇定容,浓度为 10μg/mL,于4℃下保存。 3.4.3 基质标准工作液:根据需要,取适量的标准中间液,用空白样品提取液配成不同浓度的基质标准 工作液,现用现配。 3.5 材料 3.5.1 桔青霉素免疫亲和柱:柱体积3mL,最大柱容量20ng,或等效柱。 3.5.2 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5μm。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪,配荧光检测器。 4.2 分析天平:感量0.0001g和0.01g。 4.3 高速均质器:≥12000r/min。 4.4 混匀器。 5 分析步骤 5.1 提取 5.1.1 大米、玉米、辣椒 称取经充分粉碎均质试样10.0g(精确至0.1g)于150mL具塞锥形瓶中,加入50mL甲醇-水 (70+30)提取液,以高速均质器高速均质提取2min,过滤提取液,移取1.0mL滤液,置于另一干净的 容器中,加入49mL10mmol/L磷酸溶液(pH7.5)稀释、混匀;以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。 5.1.2 红曲及其制品 称取经充分粉碎均质试样1.0g(精确至0.1g)于50mL具塞锥形瓶中,加入20mL甲醇-水 (70+30)提取液,以高速均质器高速均质提取2min,过滤提取液,移取1.0mL滤液,置于另一干净的 容器中,加入39mLPBS缓冲溶液稀释、混匀;以玻璃纤滤纸过滤待免疫亲和柱净化。