中华人民共和国国家标准 GB5009.24—2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.24—2016 1 前 言 本标准代替GB5413.37—2010《食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定》、 GB5009.24—2010《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定》、GB/T23212—2008《牛 奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 高效液相色谱法-荧光检测法》和SN/T1664— 2005《牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定》。 本标准与GB5413.37—2010相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定”; ———增加了方法适用范围; ———增加了对黄曲霉毒素M2的检测; ———修改了酶联免疫法,并修改第三法名称为酶联免疫吸附筛查法; ———修改了液相色谱-质谱联用法; ———修改了液相色谱法的前处理方法; ———删除了免疫层析净化荧光分光度法。GB5009.24—2016 2 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定 1 范围 本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2(以下简称AFTM1和AFTM2)的测定 方法。 第一法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法,适用于乳、乳制品和含乳特殊膳食用食品中AFTM1 和AFTM2的测定。 第二法为高效液相色谱法,适用范围同第一法。 第三法为酶联免疫吸附筛查法,适用于乳、乳制品和含乳特殊膳食用食品中AFTM1的筛查测定。 第一法 同位素稀释液相色谱-串联质谱法 2 原理 试样中的黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2用甲醇-水溶液提取,上清液用水或磷酸盐缓冲液稀释 后,经免疫亲和柱净化和富集,净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离,串联质谱检测,同位素内标 法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.3 乙酸铵(CH3COONH4)。 3.1.4 氯化钠(NaCl)。 3.1.5 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.1.6 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.7 氯化钾(KCl)。 3.1.8 盐酸(HCl)。 3.1.9 石油醚(CnH2n+2):沸程为30℃~60℃。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸铵溶液(5mmol/L):称取0.39g乙酸铵,溶于1000mL水中,混匀。 3.2.2 乙腈-水溶液(25+75):量取250mL乙腈加入750mL水中,混匀。 3.2.3 乙腈-甲醇溶液(50+50):量取500mL乙腈加入500mL甲醇中,混匀。GB5009.24—2016 3 3.2.4 磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸 氢二钠)、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾,用900mL水溶解后,用盐酸调节pH至7.4,再加水至 1000mL。 3.3 标准品 3.3.1 AFTM1标准品(C17H12O7,CAS:6795-23-9):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质。 3.3.2 AFTM2标准品(C17H14O7,CAS:6885-57-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质。 3.3.3 13C17-AFTM1同位素溶液(13C17H14O7):0.5μg/mL。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液(10μg/mL):分别称取AFTM1和AFTM21mg(精确至0.01mg),分别用乙腈 溶解并定容至100mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中,在-20℃下避光密封保存。临用前进行浓度校 准(校准方法参见附录A)。 3.4.2 混合标准储备溶液(1.0μg/mL):分别准确吸取10μg/mLAFTM1和AFTM2标准储备液1.00mL 于同一10mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,得到1.0μg/mL的混合标准液。此溶液密封后避光4℃ 保存,有效期3个月。 3.4.3 混合标准工作液(100ng/mL):准确吸取混合标准储备溶液(1.0μg/mL)1.00mL至10mL容 量瓶中,乙腈定容。此溶液密封后避光4℃下保存,有效期3个月。 3.4.4 50ng/mL同位素内标工作液1(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)1mL,用 乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定液体样品时使用。有效期3个月。 3.4.5 5ng/mL同位素内标工作液2(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)100μL,用 乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定固体样品时使用。有效期3个月。 3.4.6 标准系列工作溶液:分别准确吸取标准工作液5μL、10μL、50μL、100μL、200μL、500μL至 10mL容量瓶中,加入100μL50ng/mL的同位素内标工作液,用初始流动相定容至刻度,配制AFT M1和AFTM2的浓度均为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的 系列标准溶液。 4 仪器和设备 4.1 天平:感量0.01g、0.001g和0.00001g。 4.2 水浴锅:温控50℃±2℃。 4.3 涡旋混合器。 4.4 超声波清洗器。 4.5 离心机:≥6000r/min。 4.6 旋转蒸发仪。 4.7 固相萃取装置(带真空泵)。 4.8 氮吹仪。 4.9 液相色谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源。 4.10 圆孔筛:1mm~2mm孔径。 4.11 玻璃纤维滤纸:快速,高载量,液体中颗粒保留1.6μm。 4.12 一次性微孔滤头:带0.22μm微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可