中华人民共和国国家标准 GB5009.253—2016 食品安全国家标准 动物源性食品中全氟辛烷磺酸(PFOS)和 全氟辛酸(PFOA)的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.253—2016 1 食品安全国家标准 动物源性食品中全氟辛烷磺酸(PFOS)和 全氟辛酸(PFOA)的测定 1 范围 本标准规定了动物源性食品中全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸(PFOA)含量的同位素稀释液相 色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于动物源性食品中PFOS和PFOA含量的测定。 2 原理 试样中PFOS和PFOA经乙腈提取,通过分散固相萃取净化,用液相色谱-串联质谱仪测定,采用 内标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.3 盐酸(HCl)。 3.4 氯化钠(NaCl)。 3.5 乙酸铵(CH3COONH4):色谱纯。 3.6 N-丙基乙二胺固相吸附剂(PSA):40μm~60μm,ProElut填料,或相当者。 3.7 C18吸附剂:40μm~60μm,ProElut填料,或相当者。 3.8 石墨化碳黑吸附剂(GCB):40μm~60μm,ProElut填料,或相当者。 3.9 乙酸铵溶液(5mmol/L):准确称0.3855g(精确至0.0001g)乙酸铵,用水溶解定容至1000mL。 3.10 全氟辛烷磺酸(PFOS)和全氟辛酸(PFOA)标准品溶液:准确称取PFOA[纯度≥98%,CAS: 335-67-1,CF3(CF2)6COOH]和PFOS(纯度≥99%,CAS:1763-23-1,C8HF17O3S)各10.00mg(精确至 0.0001g),用甲醇稀释至100mL,配置成浓度均为100μg/mL的PFOA和PFOS标准溶液。-4℃ 环境下保存,有效期为6个月。 3.11 PFOA标准储备溶液:吸取PFOA标准品溶液,用甲醇稀释,配制成浓度为100.0μg/L的PFOA 标准储备溶液;PFOS标准储备溶液:吸取PFOS标准溶液,用甲醇稀释,配制成浓度为100.0μg/L的 PFOS标准储备溶液。均在-4℃环境下保存,有效期为4个月。 注:全氟辛烷磺酸(PFOS)在溶液中以全氟辛烷磺酸离子状态存在,样品溶液以及标准溶液以全氟辛烷磺酸定量。 3.12 混合系列标准工作溶液:吸取标准储备溶液,用甲醇稀释,配制成PFOA浓度依次为0.05μg/L、 0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L,PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、 10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L的混合系列标准工作溶液。-4℃环境下保存,有效期为2个月。 3.13 13C4-PFOA标准品溶液:通过甲醇稀释配制,稀释至浓度为50.0μg/mL的标准品溶液;GB5009.253—2016 2 1,2,3,4-13C4-PFOS标准品溶液:通过甲醇稀释配制,稀释至浓度为50.0μg/mL的标准品溶液。均在 -4℃环境下保存,有效期为6个月。 3.14 内标混合使用溶液Ⅰ:吸取13C4-PFOA和1,2,3,4-13C4-PFOS标准品溶液,用甲醇稀释,配制 成13C4-PFOA和1,2,3,4-13C4-PFOS浓度分别为10.0μg/L和50.0μg/L的内标混合使用溶液。 -4℃环境下保存,有效期为4个月。 3.15 内标混合使用溶液Ⅱ:吸取13C4-PFOA和1,2,3,4-13C4-PFOS内标混合使用溶液Ⅰ,用甲醇稀 释,配制成13C4-PFOA和1,2,3,4-13C4-PFOS浓度分别为1.0μg/L和5.0μg/L的内标混合使用溶液。 -4℃环境下保存,有效期为2个月。 3.16 含有碳13同位素内标的混合系列标准工作溶液:吸取标准储备溶液以及内标混合使用溶液Ⅰ, 用甲醇稀释,配制成PFOA浓度依次为0.05μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L, PFOS浓度依次为0.1μg/L、0.2μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、40.0μg/L,以及13C4-PFOA和 1,2,3,4-13C4-PFOS浓度均分别为1.0μg/L和5.0μg/L的含有13C同位素内标的混合系列标准工作溶 液。-4℃环境下保存,有效期为2个月。 3.17 滤膜:0.22μm,有机相型。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 4.2 氮吹仪。 4.3 粉碎机。 4.4 离心机,转速≥5000r/min。 4.5 均质机,参考转速:3400r/min~24000r/min。 4.6 分析天平:感量0.1mg和0.01g。 5 样品制备 鱼、虾、蟹、贝类、章鱼、鸡肉、猪肉、牛肉取其可食部分(去骨,去壳),切成小块,用粉碎机制成肉糜; 蛋品去壳,制成匀浆;牛奶,混匀备用。将样品置于玻璃样品瓶中,密封,标识后置于-18℃保存。 6 分析步骤 6.1 样品前处理 6.1.1 提取 称取试样5g(准确至0.01g)(样品使用前解冻均质),置于50mL聚丙烯离心管中,加入内标混合 使用溶液Ⅱ400μL,加水5mL,漩涡混合1min,加入10mL乙腈(3.2)和30μL盐酸(3.3),震荡 10min。加入2g氯化钠(3.4),再次振摇10min,以5000r/min离心10min。移取上层乙腈溶液于另 一试管中,在45℃水浴中氮气吹至约4mL,待净化。 6.1.2 净化 将上述溶液转移至装有100mgPSA(3.6)、40mgC18(3.7)和20mgGCB(3.8)的15mL聚丙烯离 心管中,振摇10min,以5000r/min离心10min,移取上清溶液于另一试管中,在45℃水浴中氮气吹 至干,用1mL甲醇(3.1)溶解,吸入1mL注射器,经0.22μm有机滤膜过滤后,待测。GB5009.253—2016 3 6.2 测定 6.2.1 液相色谱参考条件 6.2.1.1 为降低高效液相色谱管道中引入的PFOS和PFOA的污染,液相系统中加一预柱,并对部分 特氟龙材质管路替换为PEEK管路或不锈钢管路。 6.2.1.2 分析色谱柱:C18,150mm×2.1mm(内径),5μm,或相当者。 6.2.1.3 预吸附柱:C18,50mm×4.6mm(内径),5μm,或相当者。 6.2.1.4 流动相梯度洗脱程序见表1。 6.2.1.5 流速:200μL/min。 6.2.1.6 进样量:10μL。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间 min5mmol/L乙酸铵 %甲醇 % 0.00 90 10 1.00 90 10 1.01 50 50 9.00 20 80 9.01 70 30 10.0 70 30 6.2.2 质谱参考条件 6.2.2.1 离子源:电喷雾离子源负离子模式(ESI-)。 6.2.2.2 扫描方式:多反应监测模式(MRM)。 6.2.2.3 分辨率:单位分辨率。 其他质谱条件参见附录A。 6.2.3 定性测定 按照6.2.1和6.2.2所述条件测定试样和标准工作溶液,试样的质量色谱峰保留时间应与标准物质 一致,允许偏差小于±2.5%;定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致,定性 离子参考附录A表A.1,相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围,则可判断样品中存在相应的被 测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 %>50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的最大偏差 %±20 ±25 ±30 ±50