中华人民共和国国家标准 GB5009.26—2016 食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.26—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.26—2003《食品中N-亚硝胺类的测定》。 本标准与GB/T5009.26—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定”; ———将原方法中的填充色谱柱修改为毛细管色谱柱; ———将原方法中的气相色谱高分辨质谱仪修改为气相色谱质谱仪。GB5009.26—2016 1 食品安全国家标准 食品中N-亚硝胺类化合物的测定 1 范围 本标准规定了食品中N-二甲基亚硝胺含量的测定方法。 本标准适用于肉及肉制品、水产动物及其制品中N-二甲基亚硝胺含量的测定。 第一法 气相色谱-质谱法 2 原理 试样中的N-亚硝胺类化合物经水蒸气蒸馏和有机溶剂萃取后,浓缩至一定体积,采用气相色谱-质 谱联用仪进行确认和定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯,每批应取100mL在40℃水浴上用旋转蒸发仪浓缩至1mL,在气 相色谱-质谱联用仪上应无阳性响应,如有阳性响应,则需经全玻璃装置重蒸后再试,直至阴性。 3.1.2 无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.1.3 氯化钠(NaCl):优级纯。 3.1.4 硫酸(H2SO4)。 3.1.5 无水乙醇(C2H5OH)。 3.2 试剂配制 硫酸溶液(1+3):量取30mL硫酸,缓缓倒入90mL冷水中,一边搅拌使得充分散热,冷却后小心 混匀。 3.3 标准品 N-亚硝胺标准品(C2H6N2O,CAS号:62-75-9):纯度≥98.0%。 3.4 N-亚硝胺标准溶液的制备 3.4.1 N-亚硝胺(C2H6N2O,CAS号:62-75-9)标准溶液:用二氯甲烷配制成1mg/mL的溶液。 3.4.2 N-亚硝胺标准中间液(C2H6N2O,CAS号:62-75-9)标准使用液:用二氯甲烷配制成1μg/mL的 标准使用液。GB5009.26—2016 2 4 仪器和设备 4.1 气相色谱-质谱联用仪。 4.2 旋转蒸发仪。 4.3 全玻璃水蒸气蒸馏装置或等效的全自动水蒸气蒸馏装置(见图A.1)。 4.4 氮吹仪。 4.5 制冰机。 4.6 电子天平:感量为0.01g和0.1mg。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 提取 水蒸馏装置蒸馏:准确称取200g(精确至0.01g)试样,加入100mL水和50g氯化钠于蒸馏管中, 充分混匀,检查气密性。在500mL平底烧瓶中加入100mL二氯甲烷及少量冰块用以接收冷凝液,冷 凝管出口伸入二氯甲烷液面下,并将平底烧瓶置于冰浴中,开启蒸馏装置加热蒸馏,收集400mL冷凝 液后关闭加热装置,停止蒸馏。 5.1.2 萃取净化 在盛有蒸馏液的平底烧瓶中加入20g氯化钠和3mL的硫酸(1+3),搅拌使氯化钠完全溶解。然 后将溶液转移至500mL分液漏斗中,振荡5min,必要时放气,静置分层后,将二氯甲烷层转移至另一 平底烧瓶中,再用150mL二氯甲烷分三次提取水层,合并4次二氯甲烷萃取液,总体积约为250mL。 5.1.3 浓缩 将二氯甲烷萃取液用10g无水硫酸钠脱水后,进行旋转蒸发,于40℃水浴上浓缩至5mL~10mL 改氮吹,并准确定容至1.0mL,摇匀后待测定。 5.2 气相色谱-质谱测定条件 5.2.1 气相色谱条件 毛细管气相色谱柱:INNOWAX石英毛细管柱(柱长30m,内径0.25mm,膜厚0.25μm);进样口 温度:220℃;程序升温条件:初始柱温40℃,以10℃/min的速率升至80℃,以1℃/min的速率升至 100℃,再以20℃/min的速率升至240℃,保持2min;载气:氦气;流速:1.0mL/min;进样方式:不分 流进样;进样体积:1.0μL。 5.2.2 质谱条件 选择离子检测。9.9min开始扫描N-二甲基亚硝胺,选择离子为15.0,42.0,43.0,44.0,74.0;电子 轰击离子化源(EI),电压:70eV;离子化电流:300μA;离子源温度:230℃;接口温度:230℃;离子源真 空度:1.33×10-4Pa。 5.3 标准曲线的制作 分别准确吸取N-亚硝胺的混合标准储备液(1μg/mL)配制标准系列的浓度为0.01μg/mL、