中华人民共和国国家标准 GB5009.272—2016 食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、 磷脂酰肌醇的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.272—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T21493—2008《大豆磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定》和 NY/T1798—2009《植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T21493—2008和NY/T1798—2009相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的 测定”; ———统一了标准曲线范围。GB5009.272—2016 1 食品安全国家标准 食品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、 磷脂酰肌醇的测定 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定大豆磷脂、大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱、磷 脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇三种组分含量的方法。 本标准适用于含油大豆磷脂、脱油大豆磷脂、大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱 (PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)的测定。本标准不适用于大豆溶血磷脂酰胆碱及大豆溶血 磷脂乙醇胺的测定。 2 原理 试样直接溶解或经三氯甲烷提取,氨基固相萃取柱净化后,高效液相色谱分离,紫外检测器检测,外 标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷[CH3(CH2)4CH3]:色谱纯。 3.1.2 异丙醇[(CH3)2CHOH]:色谱纯。 3.1.3 乙酸(CH3COOH):色谱纯。 3.1.4 三氯甲烷(CHCl3)。 3.1.5 乙醚(CH3CH2OCH2CH3)。 3.1.6 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸水溶液(1mL/100mL):吸取1mL乙酸,加入适量水中,用水定容至100mL。 3.2.2 正己烷-异丙醇-乙酸水溶液混合溶液(8+8+1):取正己烷80mL,异丙醇80mL,乙酸水溶液 10mL,混匀。 3.2.3 乙酸-乙醚混合溶液(2+144):取乙酸4mL和乙醚288mL,混匀。 3.2.4 三氯甲烷-异丙醇混合溶液(2+1):取三氯甲烷200mL和异丙醇100mL,混匀。 3.3 标准品 3.3.1 磷脂酰胆碱(CAS号:8002-43-5):纯度大于95%。 3.3.2 磷脂酰乙醇胺(CAS号:39382-08-6):纯度大于95%。GB5009.272—2016 2 3.3.3 磷脂酰肌醇(CAS号:97281-52-2):纯度大于95%。 3.4 标准溶液配制 磷脂标准混合溶液:分别准确称取20mg磷脂酰胆碱、20mg磷脂酰乙醇胺与10mg磷脂酰肌醇 (精确至0.1mg),用正己烷-异丙醇-乙酸水溶液混合溶液溶解并定容到10mL,此时磷脂酰胆碱、磷脂 酰乙醇胺、磷脂酰肌醇浓度分别为2mg/mL、2mg/mL、1mg/mL。分别准确吸取此溶液0.25mL、 1.25mL、2.50mL、3.75mL,并用正己烷-异丙醇-乙酸水溶液混合溶液定容到5mL。配制的混合标准 液中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺浓度分别为0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/ mL,磷脂酰肌醇浓度分别为0.05mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、0.75mg/mL、1mg/mL。密封后 低于-16℃保存备用。 3.5 材料 氨基固相萃取柱:1000mg/6mL,或性能相当者。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱仪:带紫外检测器。 4.2 分析天平:感量1mg和0.1mg。 4.3 具塞试管:100mL。 4.4 涡旋振荡器。 4.5 旋转蒸发仪:转速10r/min~120r/min。 4.6 离心机:转速至少5000r/min。 4.7 氮气浓缩装置。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 大豆磷脂试样制备及前处理 试样应避光放在密闭和防潮的容器内。样品在使用前充分混匀。 依据样品中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇含量,称取样品15mg~50mg(精确至0.1mg), 用正己烷-异丙醇-乙酸水溶液混合溶液溶解并定容至5mL,经0.45μm微孔膜过滤。密封后低于 -16℃保存备用。 5.1.2 油脂试样制备及前处理 试样按GB/T5524进行扦样和分样,分取50g,装入样品瓶备用。 准确称取油脂试样4g(精确至1mg),置于100mL具塞试管中,加入50.0mL三氯甲烷,涡旋混 合。先用1.0mL三氯甲烷活化氨基固相萃取柱,将10.0mL油脂三氯甲烷溶液移入氨基硅胶固相萃 取柱中,然后依次用2.0mL三氯甲烷-异丙醇混合溶液和3.0mL的乙酸-乙醚混合溶液淋洗小柱,然后 用3.0mL甲醇洗脱出磷脂,再重复4次,收集洗脱液。洗脱液用旋转蒸发仪,在45℃蒸至近干,转为氮 吹,吹干后加入10.0mL正己烷-异丙醇-乙酸水溶液混合溶液溶解,在4000r/min下离心5min,取上 清液用于液相色谱分析。

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