中华人民共和国国家标准 GB5009.276—2016 食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.276—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T9695.17—2008《肉与肉制品 葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定》。 本标准与GB/T9695.17—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定”; ———增加了第一法的检出限、定量限; ———修改了5.1中试样制备的方法; ———增加了“第二法 高效液相色谱法”。GB5009.276—2016 1 食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定 1 范围 本标准规定了食品中葡萄糖酸-δ-内酯含量的测定方法。 本标准第一法适用于肉与肉制品、豆制品、饮料中葡萄糖酸-δ-内酯的测定,第二法适用于食品中葡 萄糖酸-δ-内酯含量的测定。 第一法 分光光度计法 2 原理 用沸水提取试样中的葡萄糖酸-δ-内酯,过滤上清液,在氢氧化钾作用下葡萄糖酸-δ-内酯转化成葡 萄糖酸盐。葡萄糖酸盐通过葡萄糖酸激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶的作用,产生5-磷酸核酮糖并使烟酰 胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原。用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的吸光 度,然后计算出葡萄糖酸-δ-内酯的含量。 葡萄糖酸盐+腺嘌呤核苷三磷酸葡萄糖酸激酶 →6-磷酸葡萄糖酸盐+二磷酸腺苷 6-磷酸葡萄糖酸盐+NADP6-磷酸葡萄糖脱氢酶 →5-磷酸核酮糖+NADPH+CO2+H+ 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 无水乙醇(C2H6O)。 3.1.2 石油醚:沸程30℃~60℃。 3.1.3 氢氧化钾(KOH)。 3.1.4 双甘氨肽(C4H8N2O3)。 3.1.5 氯化镁(MgCl2)。 3.1.6 碳酸氢钠(NaHCO3)。 3.1.7 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐(C21H27N7NaO17P3)。 3.1.8 腺嘌呤核苷三磷酸钠盐(C10H14N5Na2O13P3)。 3.1.9 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(活力,110U/mg)。 3.1.10 葡萄糖酸激酶(活力,13U/mg)。 3.2 试剂配制 3.2.1 氢氧化钾溶液(2mol/L):称取11.22g于50mL小烧杯中,加水溶解后转移至100mL容量瓶,GB5009.276—2016 2 定容。 3.2.2 缓冲液:分别称取双甘氨肽2.64g和氯化镁0.284g溶于150mL水中,用氢氧化钾溶液调pH 至8.0,定容到200mL容量瓶(可在4℃下保存4周)。 3.2.3 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐(NADP)溶液(10mg/mL):称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠 盐50mg于带盖的小瓶中,用5.0mL水溶解(可在4℃下保存4周)。 3.2.4 腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)溶液(50mg/mL):称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐250mg和碳酸氢钠 250mg于带盖的小瓶中,加入5.0mL水溶解(可在4℃下保存4周)。 3.2.5 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGDH)溶液(2.0mg/mL):每毫升6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGDH)悬液 中含有6-PGDH2.0mg,葡萄糖酸激酶和还原型NADP氧化酶不超过0.05%(可在4℃下保存 6个月)。 3.2.6 葡萄糖酸激酶(GK)溶液(1.0mg/mL):每毫升葡萄糖酸激酶(GK)悬液中含有GK1.0mg, NADP氧化酶含量不超过0.05%(可在4℃下保存6个月)。 4 仪器和设备 4.1 紫外可见分光光度计。 4.2 分析天平:感量1mg和0.1mg。 4.3 匀质机。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 肉与肉制品、豆制品等固体样品 取有代表性的样品不少于200g,用匀质机制成匀浆。制成后的试样应尽快分析,若不立即分析,应 密封冷冻贮存。贮存的试样在启用时应重新混匀。 5.1.2 饮料等液体样品 摇匀后直接取样。 5.2 提取 肉制品:称取2g~10g(精确至0.001g)试样于50mL烧杯中,加入10mL石油醚洗涤,用玻璃棒 搅拌均匀,静置15min后,用干燥滤纸过滤,重复洗涤三次。再用10mL无水乙醇洗涤三次。然后将 滤纸上残渣转移至原小烧杯中,加30mL水煮沸,待冷却后用氢氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为 10,用水定容至100mL容量瓶。过滤,滤液待上机用。 豆制品:称取2g~10g(精确至0.001g)试样于50mL烧杯中,加30mL水提取,煮沸,冷却后用氢 氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为10.0,用水定容至100mL容量瓶。过滤,滤液待上机用。 饮料:过滤,准确吸取30mL滤液用氢氧化钾溶液(2mol/L)调至溶液pH为10,用水定容至 100mL容量瓶,待上机用。 5.3 测定 取两个1cm比色皿,一个为试验皿,一个为空白皿。分别按序加入缓冲液(3.2.2)2.50mL、NADP 溶液(10mg/mL)0.1mL和ATP溶液(50mg/mL)0.1mL,加盖混匀;分别在试验皿中加入提取液 0.2mL,空白皿中加入水0.2mL,加盖混匀。再分别加入6-PGDH溶液(2.0mg/mL)0.05mL,加盖混