书 书 书/G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ５００９ ． ８２ — ２０１６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G21 /G22 /G29 /G2A /G2B /G2C 犃 、 犇 、 犈 /G2D /G2E /G2F ２０１６  １２  ２３ /G30 /G31 ２０１７  ０６  ２３ /G32 /G33 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G2B /G2C /G26 /G2D /G2E /G2C /G2F /G30 /G31 /G32 /G27 /G28 /G33 /G34 /G35 /G34 /G36 /G37 /G38 /G39 /G3A /G3B /G30 /G31书 书 书犌犅 ５００９ ． ８２ — ２０１６ Ⅰ 　　　　前 　　 言 　　 本标准代替 ＧＢ ／ Ｔ５００９．８２ — ２００３ 《 食品中维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 的测定 》、 ＧＢ５４１３．９ — ２０１０ 《 食品安全国家标准 　 婴幼儿食品和乳品中维生素 Ａ 、 Ｄ 、 Ｅ 的测定 》、 ＧＢ ／ Ｔ９６９５．２６ — ２００８ 《 肉与肉制品 　 维生素 Ａ 含量测定 》、 ＧＢ ／ Ｔ９６９５．３０ — ２００８ 《 肉与肉制品 　 维生素 Ｅ 含量测定 》、 ＮＹ ／ Ｔ１５９８ — ２００８ 《 食用植物油中维生素 Ｅ 组分和含量的测定 　 高效液相色谱法 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ５００９．８２ — ２００３ 相比 ， 主要变化如下 ： ——— 标准名称修改为 “ 食品安全国家标准 　 食品中维生素 Ａ 、 Ｄ 、 Ｅ 的测定 ”； ——— 增加了 “ 食品中维生素 Ｅ 的测定 　 正相高效液相色谱法 ”； ——— 增加了 “ 食品中维生素 Ｄ 的测定 　 液相色谱  串联质谱法 ”； ——— 增加了 “ 食品中维生素 Ｄ 的测定 　 高效液相色谱法 ”； ——— 修改了 “ 食品中维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 的测定 　 反相高效液相色谱法 ”； ——— 修改了维生素 Ｅ 异构体的反相色谱分离条件 ， 可同时分离测定 ４ 种生育酚异构体 ； ——— 删除了苯并芘内标定量法 ， 改用外标法定量 ； ——— 删除了 “ 比色法 ” 测定维生素 Ａ 。犌犅 ５００９ ． ８２ — ２０１６ １ 　　　　食品安全国家标准 食品中维生素 犃 、 犇 、 犈 的测定 １ 　 范围 本标准规定了食品中维生素 Ａ 、 维生素 Ｅ 和维生素 Ｄ 的测定方法 。 本标准第一法适用于食品中维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 的测定 。 本标准第二法适用于食用油 、 坚果 、 豆类和辣椒粉等食物中维生素 Ｅ 的测定 。 本标准第三法适用于食品中维生素 Ｄ ２ 和维生素 Ｄ ３ 的测定 。 本标准第四法适用于配方食品中维生素 Ｄ ２ 或维生素 Ｄ ３ 的测定 。 第一法 　 食品中维生素 犃 和维生素 犈 的测定 　 反相高效液相色谱法 ２ 　 原理 试样中的维生素 Ａ 及维生素 Ｅ 经皂化 （ 含淀粉先用淀粉酶酶解 ）、 提取 、 净化 、 浓缩后 ， Ｃ ３０ 或 ＰＦＰ 反 相液相色谱柱分离 ， 紫外检测器或荧光检测器检测 ， 外标法定量 。 ３ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 本方法所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ３ ． １ 　 试剂 ３ ． １ ． １ 　 无水乙醇 （ Ｃ ２ Ｈ ５ ＯＨ ）： 经检查不含醛类物质 ， 检查方法参见 Ａ．１ 。 ３ ． １ ． ２ 　 抗坏血酸 （ Ｃ ６ Ｈ ８ Ｏ ６ ）。 ３ ． １ ． ３ 　 氢氧化钾 （ ＫＯＨ ）。 ３ ． １ ． ４ 　 乙醚 ［（ ＣＨ ３ ＣＨ ２ ） ２ Ｏ ］： 经检查不含过氧化物 ， 检查方法参见 Ａ．２ 。 ３ ． １ ． ５ 　 石油醚 （ Ｃ ５ Ｈ １２ Ｏ ２ ）： 沸程为 ３０℃ ～ ６０℃ 。 ３ ． １ ． ６ 　 无水硫酸钠 （ Ｎａ ２ ＳＯ ４ ）。 ３ ． １ ． ７ 　 ｐＨ 试纸 （ ｐＨ 范围 １ ～ １４ ）。 ３ ． １ ． ８ 　 甲醇 （ ＣＨ ３ ＯＨ ）： 色谱纯 。 ３ ． １ ． ９ 　 淀粉酶 ： 活力单位 ≥ １００Ｕ ／ ｍｇ 。 ３ ． １ ． １０ 　 ２ ， ６ 二叔丁基对甲酚 （ Ｃ １５ Ｈ ２４ Ｏ ）： 简称 ＢＨＴ 。 ３ ． ２ 　 试剂配制 ３ ． ２ ． １ 　 氢氧化钾溶液 （ ５０ｇ ／ １００ｇ ）： 称取 ５０ｇ 氢氧化钾 ， 加入 ５０ｍＬ 水溶解 ， 冷却后 ， 储存于聚乙烯瓶中 。 ３ ． ２ ． ２ 　 石油醚  乙醚溶液 （ １＋１ ）： 量取 ２００ｍＬ 石油醚 ， 加入 ２００ｍＬ 乙醚 ， 混匀 。犌犅 ５００９ ． ８２ — ２０１６ ２ 　　　　 ３ ． ２ ． ３ 　 有机系过滤头 （ 孔径为 ０．２２ μ ｍ ）。 ３ ． ３ 　 标准品 ３ ． ３ ． １ 　 维生素 犃 标准品 视黄醇 （ Ｃ ２０ Ｈ ３０ Ｏ ， ＣＡＳ 号 ： ６８２６８ ）： 纯度 ≥ ９５％ ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ３ ． ３ ． ２ 　 维生素 犈 标准品 ３ ． ３ ． ２ ． １ 　 α  生育酚 （ Ｃ ２９ Ｈ ５０ Ｏ ２ ， ＣＡＳ 号 ： １０１９１４１０ ）： 纯度 ≥ ９５％ ， 或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质 。 ３ ． ３ ． ２ ． ２ 　 β  生育酚 （ Ｃ ２８ Ｈ ４８ Ｏ ２ ， ＣＡＳ 号 ： １４８０３８ ）： 纯度 ≥ ９５％ ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ３ ． ３ ． ２ ． ３ 　 γ  生育酚 （ Ｃ ２８ Ｈ ４８ Ｏ ２ ， ＣＡＳ 号 ： ５４２８４ ）： 纯度 ≥ ９５％ ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ３ ． ３ ． ２ ． ４ 　 δ  生育酚 （ Ｃ ２７ Ｈ ４６ Ｏ ２ ， ＣＡＳ 号 ： １１９１３１ ）： 纯度 ≥ ９５％ ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质 。 ３ ． ４ 　 标准溶液配制 ３ ． ４ ． １ 　 维生素 Ａ 标准储备溶液 （ ０．５００ｍｇ ／ ｍＬ ）： 准确称取 ２５．０ｍｇ 维生素 Ａ 标准品 ， 用无水乙醇溶解 后 ， 转移入 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 定容至刻度 ， 此溶液浓度约为 ０．５００ｍｇ ／ ｍＬ 。 将溶液转移至棕色试剂瓶中 ， 密封后 ， 在 －２０℃ 下避光保存 ， 有效期 １ 个月 。 临用前将溶液回温至 ２０℃ ， 并进行浓度校正 （ 校正方法参见附录 Ｂ ）。 ３ ． ４ ． ２ 　 维生素 Ｅ 标准储备溶液 （ １．００ｍｇ ／ ｍＬ ）： 分别准确称取 α  生育酚 、 β  生育酚 、 γ  生育酚和 δ  生育酚各 ５０．０ｍｇ ， 用无水乙醇溶解后 ， 转移入 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 定容至刻度 ， 此溶液浓度约为 １．００ｍｇ ／ ｍＬ 。 将溶液转移至棕色试剂瓶中 ， 密封后 ， 在 －２０℃ 下避光保存 ， 有效期 ６ 个月 。 临用前将溶液回温至 ２０℃ ， 并进行浓度校正 （ 校正方法参见附录 Ｂ ）。 ３ ． ４ ． ３ 　 维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 混合标准溶液中间液 ： 准确吸取维生素 Ａ 标准储备溶液 １．００ｍＬ 和维生素 Ｅ 标准储备溶液各 ５．００ｍＬ 于同一 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 用甲醇定容至刻度 ， 此溶液中维生素 Ａ 浓度为 １０．０ μ ｇ ／ ｍＬ ， 维生素 Ｅ 各生育酚浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 。 在 －２０℃ 下避光保存 ， 有效期半个月 。 ３ ． ４ ． ４ 　 维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 标准系列工作溶液 ： 分别准确吸取维生素 Ａ 和维生素 Ｅ 混合标准溶液中间液 ０．２０ｍＬ 、 ０．５０ｍＬ 、 １．００ｍＬ 、 ２．００ｍＬ 、 ４．００ｍＬ 、 ６．００ｍＬ 于 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用甲醇定容至刻度 ， 该标准系列中维生素 Ａ 浓度为 ０．２０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ０．５０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １．００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２．００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ４．００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ６．００ μ ｇ ／ ｍＬ ， 维生素 Ｅ 浓度为 ２．００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５．００ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ４０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ６０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 。 临用前配制 。 ４ 　 仪器和设备 ４ ． １ 　 分析天平 ： 感量为 ０．０１ｍｇ 。 ４ ． ２ 　 恒温水浴振荡器 。 ４ ． ３ 　 旋转蒸发仪 。 ４ ． ４ 　 氮吹仪 。 ４ ． ５ 　 紫外分光光度计 。 ４ ． ６ 　 分液漏斗萃取净化振荡器 。