中华人民共和国国家标准 GB5009.86—2016 食 品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.86—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.86—2003《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4-二硝基 苯肼法)》、GB/T5009.159—2003《食品中还原型抗坏血酸的测定》和GB6195—1986《水果、蔬菜维生素 C含量测定法(2,6-二氯靛酚滴定法)》。 本标准与GB/T5009.86—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定”; ———扩大了方法的适用范围; ———增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限; ———删除了2,4-二硝基苯肼法; ———增加了2,6-二氯靛酚滴定法; ———按照GB/T20001.4—2015对原标准的结构进行了修改。GB5009.86—2016 1 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法、荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法测定食品中抗坏血酸的方法。 本标准第一法适用于乳粉、谷物、蔬菜、水果及其制品、肉制品、维生素类补充剂、果冻、胶基糖果、八 宝粥、葡萄酒中的L(+)-抗坏血酸、D(-)-抗坏血酸和L(+)-抗坏血酸总量的测定。第二法适用于乳 粉、蔬菜、水果及其制品中L(+)-抗坏血酸总量的测定。第三法适用于水果、蔬菜及其制品中L(+)-抗 坏血酸的测定。 2 术语和定义 2.1 抗坏血酸:一种具有抗氧化性质的有机化合物。又称为“维生素C”,是人体必需的营养素之一。 2.2 L(+)-抗坏血酸:左式右旋光抗坏血酸。具有强还原性,对人体具有生物活性。 2.3 D(-)-抗坏血酸:又称异抗坏血酸。具有强还原性,但对人体基本无生物活性。 2.4 L(+)-脱氢抗坏血酸:L(+)-抗坏血酸极易被氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸,L(+)-脱氢抗坏血酸 亦可被还原为L(+)-抗坏血酸。通常称为脱氢抗坏血酸。 2.5 L(+)-抗坏血酸总量:将试样中L(+)-脱氢抗坏血酸还原成的L(+)-抗坏血酸或将试样中 L(+)-抗坏血酸氧化成的L(+)-脱氢抗坏血酸后测得的L(+)-抗坏血酸总量。 第一法 高效液相色谱法 3 原理 试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中 L(+)-抗坏血酸和D(-)-抗坏血酸直接用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定;试样中 的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液进行还原后,用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏 血酸总量,或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。以色谱峰 的保留时间定性,外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 偏磷酸(HPO3)n:含量(以HPO3计)≥38%。 4.1.2 磷酸三钠(Na3PO4·12H2O)。 4.1.3 磷酸二氢钾(KH2PO4)。GB5009.86—2016 2 4.1.4 磷酸(H3PO4):85%。 4.1.5 L-半胱氨酸(C3H7NO2S):优级纯。 4.1.6 十六烷基三甲基溴化铵(C19H42BrN):色谱纯。 4.1.7 甲醇(CH3OH):色谱纯。 4.2 试剂配制 4.2.1 偏磷酸溶液(200g/L):称取200g(精确至0.1g)偏磷酸(4.1.1),溶于水并稀释至1L,此溶液保 存于4℃的环境下可保存一个月。 4.2.2 偏磷酸溶液(20g/L):量取50mL200g/L偏磷酸溶液,用水稀释至500mL。 4.2.3 磷酸三钠溶液(100g/L):称取100g(精确至0.1g)磷酸三钠,溶于水并稀释至1L。 4.2.4 L-半胱氨酸溶液(40g/L):称取4gL-半胱氨酸,溶于水并稀释至100mL。临用时配制。 4.3 标准品 4.3.1 L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6):纯度≥99%。 4.3.2 D(-)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6):纯度≥99%。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL):准确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至 0.01mg),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。该贮备液在2℃~8℃避光条件下可保存一周。 4.4.2 D(-)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL):准确称取D(-)-抗坏血酸标准品0.01g(精确 至0.01mg),用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。该贮备液在2℃~8℃避光条件下可保存一周。 4.4.3 抗坏血酸混合标准系列工作液:分别吸取L(+)-抗坏血酸和D(-)-抗坏血酸标准贮备液0mL, 0.05mL,0.50mL,1.0mL,2.5mL,5.0mL,用20g/L的偏磷酸溶液定容至100mL。标准系列工作液 中L(+)-抗坏血酸和D(-)-抗坏血酸的浓度分别为0μg/mL、0.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、 25.0μg/mL、50.0μg/mL。临用时配制。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2 pH计:精度为0.01。 5.3 天平:感量为0.1g、1mg、0.01mg。 5.4 超声波清洗器。 5.5 离心机:转速≥4000r/min。 5.6 均质机。 5.7 滤膜:0.45μm水相膜。 5.8 振荡器。 6 分析步骤 整个检测过程尽可能在避光条件下进行。 6.1 试样制备 6.1.1 液体或固体粉末样品:混合均匀后,应立即用于检测。