中华人民共和国国家标准 GB5009.96—2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.96—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T23502—2009《食品中赭曲霉毒素A的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱 法》、GB/T25220—2010《粮油检验粮食中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法和荧光光度法》、 GB/T5009.96—2003《谷物和大豆中赭曲霉毒素A的测定》、SN/T1746—2006《进出口大豆、油菜籽和 食用植物油中赭曲霉毒素A的检验方法》、SN/T1940—2007《进出口食品中赭曲霉毒素A的测定方 法》和SN0211—1993《出口粮谷中棕曲霉毒素A的检验方法》。 本标准与GB/T23502—2009相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定”; ———增加了第三法免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法和第四法酶联免疫吸附测定法; ———增加了适用范围并优化了提取方法; ———删除了免疫亲和柱层析净化荧光光度法。GB5009.96—2016 1 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定 1 范围 本标准规定了食品中赭曲霉毒素A的测定方法。 本标准第一法适用于谷物、油料及其制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品、葡萄干、胡椒粒/粉中赭曲霉 毒素A的测定,第二法适用于玉米、稻谷(糙米)、小麦、小麦粉、大豆、咖啡、葡萄酒中赭曲霉毒素A的测 定,第三法适用于玉米、小麦等粮食产品、辣椒及其制品等、啤酒等酒类、酱油等产品、生咖啡、熟咖啡中 赭曲霉毒素A的测定,第四法适用于玉米、小麦、大麦、大米、大豆及其制品中赭曲霉毒素A的测定, 第五法适用于小麦、玉米、大豆中赭曲霉毒素A的测定。 第一法 免疫亲和层析净化液相色谱法 2 原理 用提取液提取试样中的赭曲霉毒素A,经免疫亲和柱净化后,采用高效液相色谱结合荧光检测器测 定赭曲霉毒素A的含量,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.3 冰乙酸(C2H4O2):色谱纯。 3.1.4 氯化钠(NaCl)。 3.1.5 聚乙二醇[HOCH2(CH2O·CH2)nCH2OH]。 3.1.6 吐温20(C58H114O26)。 3.1.7 碳酸氢钠(NaHCO3)。 3.1.8 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.9 浓盐酸(HCl)。 3.1.10 氮气(N2):纯度≥99.9%。 3.2 试剂配制 3.2.1 提取液Ⅰ:甲醇-水(80+20)。GB5009.96—2016 2 3.2.2 提取液Ⅱ:称取150.0g氯化钠、20.0g碳酸氢钠溶于约950mL水中,加水定容至1L。 3.2.3 提取液Ⅲ:乙腈-水(60+40)。 3.2.4 冲洗液:称取25.0g氯化钠、5.0g碳酸氢钠溶于约950mL水中,加水定容至1L。 3.2.5 真菌毒素清洗缓冲液:称取25.0g氯化钠、5.0g碳酸氢钠溶于水中,加入0.1mL吐温20,用水 稀释至1L。 3.2.6 磷酸盐缓冲液:称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾溶解于约990mL 水中,用浓盐酸调节pH至7.0,用水稀释至1L。 3.2.7 碳酸氢钠溶液(10g/L):称取1.0g碳酸氢钠,用水溶解并稀释到100mL。 3.2.8 淋洗缓冲液:在1000mL磷酸盐缓冲液中加入1.0mL吐温20。 3.3 标准品 赭曲霉毒素A(C20H18ClNO6,CAS号:303-47-9),纯度≥99%。或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 赭曲霉毒素A标准储备液:准确称取一定量的赭曲霉毒素A标准品,用甲醇-乙腈(50+50)溶 解,配成0.1mg/mL的标准储备液,在-20℃保存,可使用3个月。 3.4.2 赭曲霉毒素A标准工作液:根据使用需要,准确移取一定量的赭曲霉毒素A标准储备液(3.4.1),用 流动相稀释,分别配成相当于1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL的标准工作液,4℃ 保存,可使用7d。 3.5 材料 3.5.1 赭曲霉毒素A免疫亲和柱:柱规格1mL或3mL,柱容量≥100ng,或等效柱。 3.5.2 定量滤纸。 3.5.3 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5μm,无荧光特性。 4 仪器和设备 4.1 分析天平:感量0.001g。 4.2 高效液相色谱仪,配荧光检测器。 4.3 高速均质器:≥12000r/min。 4.4 玻璃注射器:10mL。 4.5 试验筛:孔径1mm。 4.6 空气压力泵。 4.7 超声波发生器:功率>180W。 4.8 氮吹仪。 4.9 离心机:≥10000r/min。 4.10 涡旋混合器。 4.11 往复式摇床:≥250r/min。 4.12 pH计:精度为0.01。