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中华人民共和国国家标准 GB 5413.18—2010 中华人民共和国卫生部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 C的测定 National food safety standard Determination of vitamin C in foods for infants and young children, milk and milk products GB 5413.18—2010 I 前 言 本标准代替GB/T 5413.18-1997 《婴幼儿配方食品和乳粉 维生素C的测定》。 本标准与GB/T 5413.18-1997 相比,主要变化如下: ——明确了酶的活力单位; ——改变了邻苯二胺溶液浓度; ——含淀粉试样处理进行了改变; ——增加了加入硼酸—乙酸钠溶液后的反应时间; ——增加了加入邻苯二胺溶液后的反应时间。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: ——GB 5413-1985 、GB/T 5413.18-1997 。 GB 5413.18—2010 1 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 C的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素 C的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素 C的测定。本标准测定的是还原型维生素 C和氧化型维 生素 C的总量。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。 3 原理 维生素 C(抗坏血酸)在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸,它与邻苯二胺反应生成荧光物质,用 荧光分光光度计测定其荧光强度,其荧光强度与维生素 C的浓度成正比,以外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的三级水。 4.1 淀粉酶:酶活力 1.5 U/mg ,根据活力单位大小调整用量。 4.2 偏磷酸—乙酸溶液 A:称取 15 g偏磷酸及 40 mL乙酸(36 % )于 200 mL水中,溶解后稀释至 500 mL备用。 4.3 偏磷酸—乙酸溶液 B:称取 15 g偏磷酸及 40 mL乙酸(36 % )于 100 mL水中,溶解后稀释至 250 mL备用。 4.4 酸性活性炭:称取粉状活性炭(化学纯, 80目~ 200目)约 200 g,加入 1 L体积分数为 10 %的 盐酸,加热至沸腾,真空过滤,取下结块于一个大烧杯中,用水清洗至滤液中无铁离子为止,在 110℃~ 120℃ 烘箱(5.3)中干燥约 10 h后使用。 检验铁离子的方法:普鲁士蓝反应。将20 g/L 亚铁氰化钾与体积分数为 1 %的盐酸等 量混合,将上 述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。 4.5 乙酸钠溶液:用水溶解 500 g三水乙酸钠,并稀释至 1 L。 4.6 硼酸—乙酸钠溶液:称取 3.0 g硼酸,用乙酸钠溶液(4.5)溶解并稀释至 100 mL,临用前配制。 4.7 邻苯二胺溶液(400 mg/L ):称取 40 mg邻苯二胺,用水溶解并稀释至 100 mL,临用前配制。 GB 5413.18—2010 2 4.8 维生素 C标准溶液(100 μg/mL):称取 0.050 g维生素 C标准品,用偏磷酸—乙酸溶液 A(4.2) 溶解并定容至 50 mL,再准确吸取 10.0 mL该溶液用偏磷酸—乙酸溶液 A(4.2)稀释并定容至 100 mL, 临用前配制。 5 仪器和设备 5.1 荧光分光光度计。 5.2 天平:感量为 0.1 mg。 5.3 烘箱:温度可调。 5.4 培养箱:45 ℃ ±1 ℃。 6 分析步骤 6.1 试样处理 6.1.1 含淀粉的试样:称取约 5 g(精确至 0.0001 g)混合均匀的固体试样或约 20 g(精确至 0.0001 g) 液体试样(含维生素 C约2 mg)于 150 mL三角瓶中,加入 0.1 g淀粉酶( 4.1),固体试样加入 50 mL 45 ℃~ 50 ℃的蒸馏水, 液体试样加入 30mL 45 ℃~ 50 ℃的蒸馏水, 混合均匀后, 用氮气排除瓶中空气, 盖上瓶塞,置于 45 ℃ ± 1 ℃培养箱(5.4)内 30 min,取出冷却至室温,用偏磷酸—乙酸溶液 B(4.3) 转至 100 mL容量瓶中定容。 6.1.2 不含淀粉的试样:称取混合均匀的固体试样约 5 g(精确至 0.0001 g),用偏磷酸 —乙酸溶液 A (4.2)溶解,定容至 100 mL。或称取混合均匀的液体试样约 50 g(精确至 0.0001 g),用偏磷酸—乙 酸溶液 B(4.3)溶解,定容至 100 mL。 6.2 待测液的制备 6.2.1 将上述试样(6.1.1 ,6.1.2)及维生素 C标准溶液(4.8)转至放有约 2 g酸性活性炭(4.4)的 250 mL三角瓶中,剧烈振动,过滤(弃去约 5 mL最初滤液),即为试样及标准溶液的滤液。然后准确 吸取 5.0 mL试样及标准溶液的滤液分别置于 25 mL及50 mL放有 5.0 mL硼酸—乙酸钠溶液(4.6 )的 容量瓶中,静置 30 min后,用蒸馏水定容。以此作为试样及标准溶液的空白溶液。 6.2.2 在此 30 min内, 再准确吸取 5.0 mL试样及标准溶液的滤液于另外的 25 mL及50 mL放有 5.0 mL 乙酸钠溶液(4.5)和约 15 mL水的容量瓶中,用水稀释至刻度。以此作为试样溶液及标准溶液。 6.2.3 试样待测液:分别准确吸取 2.0 mL试样溶液( 6.2.2) 及试样的空白溶液( 6.2.1)于10.0 mL试管 中,向每支试管中准确加入 5.0 mL邻苯二胺溶液(4.7),摇匀,在避光条件下放置 60 min后待测。 6.2.4 标准系列待测液:准确吸取上述标准溶液(6.2.2 )0.5 mL 、1.0 mL、1.5 mL 和2.0 mL,分别置 于10 mL试管中,再用水补充至 2.0 mL。同时准确吸取标准溶液的空白溶液(6.2.1 )2.0 mL 于10 mL 试管中。向每支试管中准确加入 5.0 mL邻苯二胺溶液(4.7 ),摇匀,在避光条件下放置 60 min后待测。 6.3 测定 6.3.1 标准曲线的绘制 将标准系列待测液(6.2.4 )立刻移入荧光分光光度计的石英杯中,于激发波长 350 nm,发射波长 430 nm条件下测定其荧光值。以标准系列荧光值分别减去标准空白荧光值为纵坐标,对应的维生素 C 质量浓度为横坐标,绘制标准曲线。 6.3.2 试样待测液的测定
GB 5413.18-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定
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