中华人民共和国国家标准 GB 5413.31 — 2 013 201 3 - 11 - 29 发布 201 4 - 06 - 0 1 实施 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中 脲酶的测定GB 5413.31 — 2 013 I 前 言 本标准代替 GB/T 5413.31 — 1997 《婴幼儿配方食品和乳粉 脲酶的定性检验》。 本标准与 GB/T 5413.31 — 1997 相比，主要变化如下： —— 修改了标准的名称； —— 增加了尿素溶液的贮存条件； —— 增加了纳氏试剂的贮存条件； —— 增加了 判定结果的时限规定。GB 5413.31 — 2 013 1 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳 品中 脲酶的 测定 1 范围 本标准规定了 婴幼儿食品和乳 品中 脲酶 的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脲酶的定性检验。 2 原理 脲酶在适当酸碱度和温度条件下，催化尿素转化成碳酸铵。碳酸铵在碱性条件下生成氢氧化铵 ， 与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用生成棕色的碘化双汞铵。 3 试剂和材料 注 ： 除非另有 说明 ，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 尿素 （ H 2 NCONH 2 ） 。 3.1.2 钨酸钠（ Na 2 WO 4 · 2H 2 O ） 。 3.1.3 酒石酸 钾钠（ C 4 H 4 O 6 K N a · 4H 2 O ） 。 3.1.4 硫酸（ H 2 SO 4 ） 。 3.1.5 磷酸 氢二钠（ Na 2 HPO 4 ） 。 3.1.6 磷酸二氢钾（ KH 2 PO 4 ） 。 3.1.7 碘化汞（ HgI 2 ） 。 3.1.8 碘化钾（ KI ） 。 3.1.9 氢 氧化钠（ NaOH ） 。 3.2 试剂配制 3.2.1 尿素溶液 （ 10 g/L ） ： 称取 尿素 5 g ， 溶解于 500 mL 水中 。 保存于棕色试剂瓶中 ， 冰箱中冷藏 ， 有效期为 1 个月。 3.2.2 钨酸钠溶液（ 100 g/L ）：称取钨酸钠 50 g ，溶解于 500 mL 水中。 3.2.3 酒石酸 钾钠溶液（ 20 g/L ）：称取酒石酸钾钠 10 g ，溶解于 500 mL 水中。 3.2.4 硫酸 溶液 （ 50 mL/L ）：吸取硫酸 25 mL ，溶解于 500 mL 水中。 3.2.5 磷酸氢二钠溶液 ： 称取无水磷酸氢二钠 9.47 g ，溶于 1000 mL 水中。 3.2.6 磷酸二氢钾溶液： 称取磷酸二氢钾 9.07 g ，溶于 1000 mL 水中。 3.2.7 中性 缓冲溶 液： 取磷酸氢二钠溶液 611 mL ，磷酸二氢钾溶液 389 mL ，两种溶液混合均匀。 3.2.8 碘化汞 - 碘化钾混合溶液： 称取红色碘化汞 55 g ，碘化钾 41.25 g ，溶于 250 mL 水中 。GB 5413.31 — 2 013 2 3.2.9 纳氏试剂 ： 称取氢氧化钠 144 g 溶于 500 mL 水中 ， 充分溶解并冷却后 ， 再缓慢地移入 1000 mL 的容量瓶中 ， 加入 碘化汞 - 碘化钾混合 溶液 2 5 0 mL ， 加水稀释至刻度 ， 摇匀 ， 转入试剂瓶内 ， 静置后 ， 用上清液。此试剂需 棕色瓶保存，冰箱中冷藏， 有效期为 1 个月 。 4 仪器和设备 4.1 电子天平：感量为 0.01 g 。 4.2 旋涡振荡器。 4.3 恒温水浴锅 ： 40 ℃ ± 1 ℃ 。 5 分析步骤 取试管甲、乙两支，各称入 0.1 0 g 试样，再吸入 1 mL 水，振摇 0.5 min （约 100 次 ） 。然后分别 吸入 1 mL 中性缓冲溶液 。 向甲管 （ 样品管 ） 吸入 1 mL 尿素溶液 ， 再向乙管 （ 空白对照管 ） 吸入 1 m L 水。两管摇匀后，置于 40 ℃ ± 1 ℃ 水浴中保温 20 min 。从水浴中取出两管后，各吸入 4 mL 水，摇匀 ， 再吸入 1 mL 钨酸钠溶液 ， 摇匀 ， 吸入 1 mL 硫酸溶液 ， 摇匀 ， 过滤 ， 收集滤液备用 。 取上述滤液 2 mL ， 分别吸入到二支 25 mL 具塞的比色管中 。 再 各吸入 15 mL 水 ， 1 mL 酒石酸钾钠溶液 ， 和 2 mL 纳氏试 剂，最后用水定容至 25 mL ，摇匀。 5 min 内观察结果。 6 分析结果的表述 分析结果按表 1 进行判断。 表 1 结果的判断 脲酶定性 表示符号 显示情况 强阳性 ++++ 砖红色混浊或澄清液 次强阳性 +++ 桔红色澄清液 阳性 ++ 深金黄色或黄色澄清液 弱阳性 + 淡黄色或微黄色澄清液 阴性 － 样品管与空白对照管同色或更淡 7 检出限 该方法为定性法，检出限为 0.7 U 。