ICS07.080 A40 团体标准 T/CRHA002—2021 ———————————————————————————————— ———————— 人多能干细胞来源的小细胞外囊泡 Humanpluripotentstemcellderivedsmallextracellularvesicles 2021-12-28发布 中国研究型医院学会发布2022-1-1实施 全国团体标准信息平台 T/CRHA002—2021 目次 前言...............................................................................................................................................Ⅰ 1范围.................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.............................................................................................................................1 3术语、定义及缩略语.....................................................................................................................1 4技术要求.........................................................................................................................................2 5检测方法.........................................................................................................................................3 6检验规则.........................................................................................................................................4 7包装、使用说明、标签、储存及运输.........................................................................................4 8废弃物处理.....................................................................................................................................5 附录A（规范性）人多能干细胞的培养体系..................................................................................6 附录B（规范性）人多能干细胞培养上清的收集方法.................................................................7 附录C（规范性）小细胞外囊泡形态检测方法（透射电镜观察法）.........................................8 附录D（规范性）小细胞外囊泡数量检测方法（纳米流式检测法)...........................................9 附录E（规范性）小细胞外囊泡粒径检测方法（纳米流式检测法）.......................................11 附录F（规范性）小细胞外囊泡蛋白检测方法（蛋白印迹法）...............................................12 附录G（规范性）小细胞外囊泡数量与蛋白量比值计算方法...................................................13 附录H（规范性）促进细胞增殖检测方法（CCK-8法）............................................................14 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA002—2021 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会提出 本文件由中国研究型医院学会归口。 本文件起草单位：上海交通大学、南方医科大学、中山大学、江苏大学、清华大学、厦 门大学、空军军医大学、浙江大学、东南大学。 本文件主要起草人：汪泱、郑磊、王前、付清玲、钱晖、许文荣、尹航、邓志锋、李 海燕、颜晓梅、郝晓柯、李莉、陶志华、刘必成、李青、李博。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA002—2021 1人多能干细胞来源的小细胞外囊泡 1范围 本文件规定了生产人多能干细胞来源的小细胞外囊泡的技术要求、检测方法、检验规则、 包装、使用说明、标签、储存及运输和废弃物处理要求。 本文件适用于人多能干细胞来源的小细胞外囊泡的生产与检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条款。凡是注日期 的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 WS213丙型肝炎诊断 WS273梅毒诊断 WS293艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准 WS299乙型病毒性肝炎诊断标准 T/CSCB0001干细胞通用要求 T/CSCB0002人胚干细胞 T/CSCB0005人诱导多能干细胞 中华人民共和国药典 全国临床检验操作规程 3术语、定义及缩略语 3.1.术语及定义 下列术语及定义适用于本文件。 3.1.1.人多能干细胞humanpluripotentstemcell 具有在体外无限地自我更新和向三胚层分化潜能的干细胞，包括人胚干细胞和人诱导多 能干细胞。 3.1.2.人诱导多能干细胞humaninducedpluripotentstemcell 由人体细胞经重编程而获得的具有自我更新能力和向三胚层细胞分化潜能的一种干细 胞。 3.1.3.人胚干细胞humanembryonicstemcell 可在体外无限地自我更新，并且具有向三胚层细胞分化潜能的，源自人着床前胚胎中未 分化的初始细胞。 全国团体标准信息平台 T/CRHA002—2021 23.1.4.小细胞外囊泡smallextracellularvesicles 由细胞主动分泌的具有双层膜结构的直径小于200nm的微小囊泡。 3.2.缩略语 下列缩略语适用于本文件。 HBV——乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus） HCMV——人巨细胞病毒（HumanCytomegalovirus） HCV——丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus） HEBV——人类疱疹病毒（HumanEpstein-BarrVirus） HESC——人胚干细胞（humanEmbryonicStemCell） HiPSC——人诱导多能干细胞（humaninducedPluripotentStemCell） HIV——人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus） hPSC——人多能干细胞（humanPluripotentStemCell） HTLV——人类嗜T细胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus） sEVs——小细胞外囊泡（smallExtracellularVesicles） TP——梅毒螺旋体（TreponemaPallidum） 4技术要求 4.1.原材料和辅料 4.1.1.生产人多能干细胞来源的小细胞外囊泡的过程中，使用的原材料和辅料应符合 T/CSCB0001、T/CSCB0002、T/CSCB0005要求。 4.1.2.生产人多能干细胞来源的小细胞外囊泡的过程中，人多能干细胞的培养体系见附录 A。 4.2.关键质量属性 4.2.1.人多能干细胞 小细胞外囊泡生产过程的前、中、后，人多能干细胞的关键质量属性分别完全符合 T/CSCB0002和T/CSCB0005文件规定的标准。 4.2.2.小细胞外囊泡 4.2.2.1.形态 透射电镜下应呈现不聚团的具有清晰膜结构的茶托状或杯状结构，边缘清晰。 4.2.2.2.粒径 应分布在小于200nm范围内，且在范围内存在粒径峰值。 4.2.2.3.标志蛋白 小细胞外囊泡表面标志物CD9、CD81、CD63中的任意两个表达阳性；小细胞外囊泡内部 标志物TSG