ICS07.080 A40 团体标准 T/CRHA001—2021 ———————————————————————————————— ———————— 人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡 Humanmesenchymalstemcellderivedsmallextracellularvesicles 2021-12-28发布 中国研究型医院学会发布2022-1-1实施 全国团体标准信息平台 T/CRHA001—2021 目次 前言...............................................................................................................................................Ι 1范围.............................................................................................................................................1 2规范性引用文件.........................................................................................................................1 3术语、定义及缩略语.................................................................................................................1 4技术要求.....................................................................................................................................2 5检测方法.....................................................................................................................................3 6检验规则.....................................................................................................................................4 7包装、使用说明、标签、储存及运输....................................................................................5 8废弃物处理.................................................................................................................................6 附录A（规范性）人间充质干细胞的培养体系.............................................................................7 附录B（规范性）人间充质干细胞培养上清的收集方法.............................................................8 附录C（规范性）小细胞外囊泡形态检测方法（透射电镜观察法）.........................................9 附录D（规范性）小细胞外囊泡数量检测方法（纳米流式检测法).........................................10 附录E（规范性）小细胞外囊泡粒径检测方法（纳米流式检测法）.......................................12 附录F（规范性）小细胞外囊泡蛋白检测方法（蛋白印迹法）...............................................14 附录G（规范性）小细胞外囊泡数量与蛋白量比值计算方法...................................................15 附录H（规范性）抑制淋巴细胞增殖检测方法（CFSE标记法）..............................................16 附录I（规范性）抑制Th1功能检测方法（胞内因子染色法）...............................................17 全国团体标准信息平台 T/CRHA001—2021 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会提出 本文件由中国研究型医院学会归口。 本文件起草单位：南方医科大学、上海交通大学、江苏大学、中山大学、清华大学、厦 门大学、空军军医大学、浙江大学、东南大学 本文件主要起草人：郑磊、王前、汪泱、钱晖、付清玲、许文荣、尹航、邓志锋、李海 燕、颜晓梅、郝晓柯、李莉、陶志华、刘必成、李青、李博 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CRHA001—2021 1人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡 1范围 本文件规定了生产人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的技术要求、检测方法、检验规 则、包装、使用说明、标签、储存及运输和废弃物处理要求。 本文件适用于人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的生产与检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过本文件的规范性引用而成为本文件必不可少的条款。凡是注日期 的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 WS213丙型肝炎诊断 WS273梅毒诊断 WS293艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准 WS299乙型病毒性肝炎诊断标准 T/CSCB0001干细胞通用要求 T/CSCB0003人间充质干细胞 中华人民共和国药典 全国临床检验操作规程 3术语、定义及缩略语 3.1术语及定义 下列术语及定义适用于本文件。 3.1.1人间充质干细胞humanmesenchymalstemcell 一类贴壁培养后呈成纤维细胞样形态（纺锤形和梭形）、可在体外自我更新并具有成骨、 成脂、成软骨等分化能力的干细胞。 注：人间充质干细胞可由多种人体组织（如骨髓、脐带、胎盘、脂肪、脐带血等）分离 得到，也可以通过分化或转分化等方式获得；不同来源的人间充质干细胞在基因表达和分化 能力方面存在差异。 3.1.2小细胞外囊泡smallextracellularvesicles 由细胞主动分泌的具有双层膜结构的直径小于200nm的微小囊泡。 3.2缩略语 全国团体标准信息平台 T/CRHA001—2021 2下列缩略语适用于本文件。 CD——分化簇（ClusterofDifferentiation） HBV——乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus） HCMV——人巨细胞病毒（HumanCytomegalovirus） HCV——丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus） HEBV——人类疱疹病毒（HumanEpstein-BarrVirus） HIV——人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus） HTLV——人类嗜T细胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus） hMSC——人间充质干细胞（humanMesenchymalStemCell） sEVs——小细胞外囊泡（smallExtracellularVesicles） TP——梅毒螺旋体（TreponemaPallidum） 4技术要求 4.1原材料和辅料 4.1.2生产人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的过程中，使用的原材料和辅料应符合 T/CSCB0001、T/CSCB0003要求。 4.1.3生产人间充质干细胞来源的小细胞外囊泡的过程中，人间充质干细胞的培养体系见 附录A。 4.2关键质量属性 4.2.1人间充质干细胞 小细胞外囊泡生产过程的前、中、后，人间充质干细胞的关键质量属性均完全符合 T/CSCB0003文件规定的标准。 4.2.2小细胞外囊泡 4.2.2.1形态 透射电镜下应呈现不聚团的具有清晰膜结构的茶托状或杯状结构，边缘清晰。 4.2.2.2粒径 应分布在小于200nm范围内，且在范围内存在粒径峰值。 4.2.2.3标志蛋白 小细胞外囊泡表面标志物CD9、CD81、CD63中的任意两个表达阳性；小细胞外囊泡内部 标志物TSG-101、Alix中的任意一个表达阳性； 4.2.2.4纯度 全国团体标准信息平台 T/CRHA001—2021 3小细胞外囊泡阴性标志物GM130或Calnexin应为阴性；小细胞外囊泡数量与蛋白量比 值不低于1×107个颗粒/微克蛋白。 4.2.2.5免疫调节 人间充质干细胞来源的小细胞外