ICS 67.160.10 X 62 团 体 标 准 T/ NAIA 0110—2022 葡萄酒中多种非食用着色剂的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 Determination of various illegal pigment in wine LC-MS/MS 2022-03-15 发布 2022-03-31 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0110—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定 编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监管重点实验室（枸杞和葡萄酒 质量安全） ）、宁夏工商职业技术学院、宁夏回族自治区食品质量监督检验二站、宁夏化学分析测 试协会 本文件主要起草人 ：汤丽华、李谦、马雪梅、吴明、汪洪、吕毅、马桂娟、张瑶、辛世华、赵 瑞、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0110—2022 葡萄酒中多种非食用着色剂的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了葡萄酒 中碱性橙 2、碱性嫩黄 O、碱性橙 21、碱性橙 22、柑橘红 2号5种非食用 着色剂的液相色谱质谱检测方法。 本文件适用葡萄酒（包括白葡萄酒、红葡萄酒 ）中碱性橙 2、碱性嫩黄 O、碱性橙 21、碱性橙 22、柑橘红 2号的测定和确证。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 23496 食品中禁用物质的检测 碱性橙染料 高效液相色谱法 SN/T 4523 出口葡萄酒中多种非法着色剂的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 3 术语和定义 4 方法提要 液体试样经乙腈提取后，用无水硫酸镁、乙二胺 -N-丙基硅烷（ PSA）净化后，氮吹至干，定容 后经C18色谱柱分离，液相色谱 -质谱仪测定和确证，外标法定量。 5 试剂和材料 本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯， 水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1试剂 5.1.1 乙腈：色谱纯。 5.1.2 甲醇：色谱纯。 5.1.3 甲酸：优级纯。 5.1.4 0.1%甲酸水溶液： 1mL甲酸用水定容到 1000mL。 5.1.5 无水硫酸镁：优级纯。 5.1.6 氯化钠：分析纯。 5.1.7 乙二胺 -N-丙基硅烷 (PSA):40~60 μm。 5.2 标准品 5.2.1标准品：碱性橙 2（Basic Orange 2，CAS号532-82-1，C12H13CLN 4）、碱性嫩黄 O（Auramine O，CAS号， 2465-27-2 ，C17H22CLN 3）、碱性橙 21（Astrazon Orange G，CAS号3056-93-7 ， C22H23CLN 2）、罗丹明 B（Rhodamine B，CAS号 81-88-9，C28H31CLN 2O3）、碱性橙 22(Astrazon 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0110—2022 Orange R，CAS号4657-00-5 ，C28H27CLN 2)、柑橘红 2号(Citrus red 2，CAS号：6358-53-8 ，C28H16N2O3)， 纯度均 ≥98%。 5.2.2标准储备液 ：准确称取适量的标准品 ，用乙腈配制成浓度为 100.0μg/mL的标准储备溶液 ，-18 ℃保存，有效期三个月。 5.2.3 标准工作液：根据需要，用空白样品基质溶液配制适当浓度的标准工作液，临用现配。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配备电喷雾离子源 (ESI)。 6.2 分析天平： 感量 0.1mg和0.01g。 6.3 涡旋混合器。 6.4 离心机： 最大转速 10000r/min 。 6.5 氮吹仪：可温控。 6.6超声波发生器。 7 分析步骤 7.1 试样制备 将所取原始样品 1kg在瓷混样桶内充分混匀，将混匀样品置于洁净容器内密封，作为试样。 7.2 试样的提取 称取试样 10.0 g（精确到 0.01g）于50 mL聚四氟乙烯离心管中， 加入 3g无水硫酸镁、 1.5g氯化 钠，再加入 10mL乙腈，涡旋混匀 1 min，超声提取 10 min，8000 r/min离心 5 min，吸取上清液， 残渣再用 10 mL乙腈重复提取 1次，合并上清液 ，混匀，8000 r/min离心 5 min。吸取 8 mL上述混 合提取液加入内含 900mg无水硫酸镁 、150mg乙二胺 -N-丙基硅烷 （PSA）的15mL塑料离心管中净 化，涡旋混匀 1 min，8000 r/min离心 5 min，取1mL净化液，用小流速氮气吹至近干， 加入 1mL 初始流动相，涡旋混匀， 过0.22μm微孔滤膜，用于测定。 7.3仪器参考条件 7.3.1 液相色谱参考条件 7.3.1.1 色谱柱： ZORBAX Eclipse Plus C18，50 mm × 2.1 mm，粒径 1.8 μm或性能相当者。 7.3.1.2 柱温： 40℃。 7.3.1.3 流动相： A：0.1%甲酸水， B：乙腈； 梯度洗脱见表 1。 7.3.1.4 流速： 0.30mL/min 。 7.3.1.5 进样量： 2μL。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /（mL/min） 流动相 A/% 流动相 B/% 0.00 0.30 90 10 0.50 0.30 90 10 2.50 0.30 45 55 8.50 0.30 10 90 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0110—2022 10.00 0.30 0 100 11.00 0.30 90 10 15.00 0.30 90 10 7.3.2 质谱参考条件 7.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ ESI）。 7.3.2. 2扫描方式：正离子扫描。 7.3.2.3 检测方式：多反应监测（ MRM）。 7.3.2. 4离子源温度： 325℃。 7.3.2. 5气体流速： 6L/min。 7.3.2.6 雾化器压力： 45psi。 7.3.2.7 鞘气温度： 350℃。 7.3.2.8 鞘气流速： 11L/min。 7.3.2. 9毛细管电压： 3500V。 7.3.2.10 喷嘴电压： 500V。 7.3.2.11 定性离子对、定量离子对、碰撞能量等参数参见附录 A。 7.4 定量测定 根据样液中被测物含量情况 ，选定浓度相近的基质混合标准工作溶液 ，基质混合标准工作溶液 和待测样液中 5种非食用着色剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内 。基质混合标准工作溶液与 样液等体积进样测定 。标准溶液及样液均按 7.3.1和7.3.2规定的条件进行测定 ，如果样液中与标准 溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行确证， 碱性橙 2、碱性嫩黄 O、碱性橙 21、碱性橙 22、 柑橘红 2号的参考保留时间见表 2。碱性橙 2、碱性嫩黄 O、碱性橙 21、碱性橙 22、柑橘红 2号标 准品的多反应监测（ MRM）色谱图参见附录 B，采用基质溶液标准曲线外标法定量。 表2参考保留时间 被测物名称 保留时间 /（min） 碱性橙 2 2.361 碱性嫩黄 O 2.818 碱性橙