ICS 01.040.65 CCS B 04 TB 团 体 标 准 T/ NAIA 097—2021 枸杞中总酚含量的测定 分光光度法 Determination of total phenols Content in Lycium barbarum L. by Spectrophotometer 2021-12-24 发布 2021-12-31 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人： 杨春霞、王芳焕、李延斌、刘 霞、牛 艳、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 枸杞中总酚含量的测定 分光光度法 1　范围 本文件规定了枸杞中总酚含量测定的分光光度法。 本文件适用于枸杞干果、鲜果、黑果枸杞中总酚含量的测定。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 LS/T 6119 粮油检验 植物油中多酚的测定 分光光度法 T/AHFIA 005 植物提取物及其制品中总多酚含量的测定 分光光度法 3　术语和定义 本文件没有界定的术语和定义。 4　原理 采用福林酚显色分光光度法测定枸杞中的总酚含量。在碱性条件下利用多酚的还原 性，多酚可以将磷钨酸钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量成正相关，在 760 nm下测定 吸光度值，外标法定量。 5　试剂 5.1　水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 5.2　碳酸钠（ Na2CO 3）：分析纯。 5.3　福林酚试剂（ Folin-Phenol ，BR，1 mol/L）：分析纯。 5.4　无水乙醇：分析纯。 5.5　没食子酸标准品（ C7H6O5，CAS： 149-91-7）：纯度 ≥ 98 %。 5.6　10.6 % 碳酸钠溶液： 精确称取 15 g无水碳酸钠，用水溶解定容至 100 mL。 5.7　70 %乙醇提取剂：取 70 mL无水乙醇，加入 30 mL水混匀。 5.8　0.5 mg/m L没食子酸标准储备液：精确称取 12.5 mg没食子酸标准品于 25 mL棕色容 量瓶中，用甲醇定容稀释至刻度， 4 ℃避光保存待用，即浓度为 0.5 mg / mL。 5.9　没食子酸标准系列浓度配制 ：分别吸取没食子酸标准储备液 0.0、0.125、0.25、 0.50、1.00、1.50、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于25 mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度， 摇匀， 4 ℃保存待用。 没食子酸标准系列浓度为 0、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、 60.0、80.0、100.0 μg/mL。现用现配。 全国团体标准信息平台 6　仪器和设备 6.1　722分光光度计： 配1 cm比色皿。 6.2　高速粉碎机。 6.3　高速破壁机。 6.4　数控超声波清洗器。 6.5　高速冷冻离心机： 转速 10000 rpm。 6.6　分析天平：感量 0.01 g。 6.7　手持精密移液枪： 200 μL、1 mL。 7　试样制备 枸杞干果于 -18℃冷冻冰箱中保存。试验时将样品取出，采用四分法，混合均匀后缩分 至100g，立即用高速万能粉碎机粉碎，置于样品瓶中， -18℃冷冻备用。 枸杞鲜果于高速破壁机中破碎，匀浆液置于样品瓶中备用。 8　试样提取 8.1　枸杞干果试样：准确称取 1.00 g枸杞干果样于 50 mL离心管中，加入 30 mL 70 %乙 醇溶液超声提取 90 min，超声过程中振摇数次，保持固相完全分散。提取液在 9000 rmp、 4 ℃下离心 5 min，样液待用。 8.2　枸杞鲜果试样：准确称取 5.00 g枸杞鲜果 样于 50 mL离心管中，加入 30 mL 70 %乙 醇溶液超声提取 90 min，超声过程中振摇数次，保持固相完全分散。提取液在 9000 rmp、 4 ℃下离心 5 min，样液待用。 8.3　黑果枸杞试样： 准确称取 0.50 g黑果枸杞样于 50 mL离心管中，加入 30 mL 70 %乙 醇溶液超声提取 90 min，超声过程中振摇数次，保持固相完全分散。提取液在 9000 rmp、 4 ℃下离心 5 min，样液待用。 9　标准曲线的绘制 分别吸取没食子酸标系列浓度（ 5.9）1.00 mL于25 mL刻度试管中，加入 6.00 mL去 离子水， 1.0 mol/L Folin-Phenol 试剂 1.00 mL，摇匀，放置 6 min，再各加入 10.6 %的碳酸 钠溶液 4.00 mL，摇匀，室温静置 60 min，用去离子水稀释至刻度，摇匀，在 760 nm处测 定吸光度。 以浓度 x（ μg / mL）为横坐标，吸光 值A 为纵坐标，绘制标准曲线（没食子酸 标准曲线见附录 A）。 10　样品测定 取试样提取液（ 8），稀释 10 ~ 20倍。再取制备好的样品稀释液 1.00 mL于25 mL刻度 试管中，加入 6.00 mL去离子水， 1.0 mol/L Folin-Phenol 试剂 1.00 mL，摇匀，放置 6 min，再 各加入 10.6 %的碳酸钠溶液 4.00 mL，摇匀，室温静置 60 min，用去离子水稀释至刻度，摇 匀，在 760 nm处测定吸光度。根据标准曲线计算待测液中总酚浓度。 同一样品平行测定两次。 全国团体标准信息平台 11　空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行操作。 12　结果计算 枸杞中总多酚含量按公式（ 1）计算 : …………………................ （1） 式中： X—枸杞中总多酚的含量， mg/g； C—样品中总多酚的浓度， μg/mL; C0—空白中总多酚的浓度， μg/mL; m—称取样品的质量， g； V—提取液体积， mL; f—稀释倍数； 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位 有效数字。 13　精密度 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。   1000 mfV CCX0   全国团体标准信息平台 A A 附　录　 A （资料性） 没食子酸标准曲线 _________________________________ 00.10.20.30.40.50.6 0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 120.0吸光度（A） C/ug/mL 全国团体标准信息平台