ICS 11.080 C 50 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 33420—2016 压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法 Evaluation standard of biological for moist heat sterilization processes 2016-12-30发布 2017-07-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T33420—2016 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会提出并归口。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国人民解放军疾病预防控 制所、山东新华医疗器械股份有限公司、中国医学科学院协和医院、山东利尔康消毒科技股份有限公司、 3M中国有限公司、杭州鲁沃夫货物进出口有限公司。 本标准主要起草人：张流波、张剑、姚楚水、张青、王妍彦、沈瑾、黄靖雄、朱晓明、朱汉泉、史绍毅、 马玲、班海群。 GB/T33420—2016 压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法 1范围 本标准规定了压力蒸汽灭菌生物指示物的检验方法。 本标准适用于压力蒸汽灭菌生物指示物的检验。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB18281.1医疗保健产品灭菌生物指示物第1部分：通则 GB/T24628医疗保健产品灭菌生物与化学指示物测试设备 消毒技术规范（2002年版）卫生部 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 生物指示物 biological indicator;BI 3.2 carrier 载体 试验微生物的支持物。 3.3 存活时间 survival time;ST 在规定的条件下暴露于杀菌因子，试验的生物指示物中微生物存活的最长时间。 3.4 杀灭时间killing time;KT 测定生物指示物抗力时，受试样本经杀菌因子作用后，全部无菌生长的最短作用时间。 3.5 D值Dvalue 在设定的暴露条件下，杀灭特定试验微生物总数的90%所需的时间。 3.6 存活曲线 survivor curve 在固定的灭菌因子作用下，微生物的存活情况与暴露变化的关联曲线。 3.7 生物指示物抗力测试仪 biological indicator evaluator resistometer 产生限定条件下灭菌过程中物理化学变化规定组合，以测量抗力的专用设备 1 GB/T33420—2016 4检验指标与方法 4.1抗力 4.1.1菌种 用于制作压力蒸汽灭菌生物指示物的菌株为嗜热脂肪杆菌芽孢（Geobacillusstearothermophilus ATCC7953或SSIK31)或被证明具有本标准所要求的同等性能的微生物。 4.1.2菌量 回收菌量大于等于1X10CFU/片或大于等于1X105CFU/支，对于成品的指示物，载体回收的菌 量与说明书上的菌量误差在一50%～十300%之间，悬液回收的菌量与说明书上的菌量误差在土35%。 测定菌量时，应最少测试4个样本，具体检测方法参见附录A。 4.1.3D值 测试抗力时应使用生物指示物抗力测试仪，生物指示物抗力测试仪要求见GB/T24628。在121℃ 时，D值的要求：D值大于或等于1.5min，对于成品的指示物，测试的D值应在说明书上的D值 土20%的范围内。应至少使用下列2种方法进行测试： 存活曲线法测试D值，参见附录B； a)7 b) 部分阴性法测试D值，参见附录C； c)） 验证法测试D值，将a)或者b)测试出的D值和4.1.2的回收菌量的平均数带入式（1)和 式（2），计算出ST值和KT值。参照附录D进行验证： ST≥（logN。2)XD值 .(1) KT≤(logN。+4)XD 值 式中： N。—每批生物指示物的回收菌量的平均数 4.1.4存活时间与杀灭时间 在121℃时，ST值的要求：大于或等于4.5min；KT值的要求：小于或等于24min。 4.2载体的要求 符合 GB18281.1 的要求。 4.3恢复培养基的要求 4.3.1恢复培养基应满足下列要求： a)1 使10CFU～100CFU的微生物恢复生长； b)1 使损伤的微生物恢复生长； c） 经过压力蒸汽灭菌后不会产生抑制微生物生长的物质。 4.3.2恢复培养基按以下方法检验： 每个样本的恢复培养基中，接种10CFU～100CFU的嗜热脂肪杆菌芽孢（ATCC7953），同时设置 阴性对照和阳性对照，培养至规定时间后观察有无嗜热脂肪杆菌芽孢生长（一般观察培养基的颜色变 化）。如果恢复培养基有菌生长，并且阴性对照无菌生长和阳性对照有菌生长，判断恢复培养液合格。 4.4稳定性试验 取包装完好的同批次生物指示物放置于制造商建议的保存条件下，存放至标签和说明书规定的有 效期限，取出再次进行评价，牛物指示物应符合4.14.2和4.3的要求。 2